3.4 测定步骤

3.4.1 提取和净化

称取捣碎的试样约10g(精确至0.01g)，置于 150 mL三角瓶中，加80 mL凝结液(3.2.3)，混匀后，超声5 min，转移到100 mL容量瓶中，加凝结液(3.2.3)至刻度，混匀，过滤。准确吸取10.0 mL滤液过经处理的Sep-pak小柱(3.3.4)，流速小干3 mL/min，用5 mL水和5mL 10％丙酮水溶液(3.2.5)淋洗，弃淋洗液，减压抽干5 min。用20 mL 丙酮(3.2.4)洗脱，收集洗脱液，35℃旋转浓缩至近干。用流动相溶解残渣并定容至1.0 mL，过0.45 um滤膜，供液相色谱分析。

3.4.2 测定

3.4.2.1 色谱条件

进行测定的色谱条件为：

a)色谱柱：Lichrospher C₁₈ 5 um 4.6 mm×250 mm，或相当的色谱柱；

b)流动相：0.005 mol/L磷酸二氢氨+0.005 mol/L磷酸氢二钠＋甲醇(40+40+20，体积比)；

c)流速：1.0mL/min;

d)检测波长：230 nm；

e)进样量：20 uL；

f)柱温：室温。

3.4.2.2 色谱测定

根据样液中苯甲酸和山梨酸含量的情况选定峰面积相近的混合标准工作溶液。混合标准工作溶液和样液中苯甲酸和山梨酸的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对混合标准工作溶液和样液等体积参插进样测定，以保留时间定性，外标法定量。在3.4.2.1色谱条件下苯甲酸的保留时间约为7.1min,山梨酸的保留时间约为9.2 min。

3.4.3 空白试验

除不加试样外，均按上述步骤进行。

3.4.4 结果计算和表述

按式(1)计算试样中苯甲酸或山梨酸的含量，或采用色谱数据处理系统计算。计算结果需扣除空白值。

式中：

X—试样中苯甲酸或山梨酸的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；

A—样液中苯甲酸或山梨酸的峰面积；

A_s—标准工作液中苯甲酸或山梨酸的峰面积；

c—标准工作液中苯甲酸或山梨酸的浓度，单位为微克每毫升(ug/mL);

V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL);

m—最终样液所代表的试样量，单位为克(g)。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法对腐乳中山梨酸、苯甲酸的测定低限为2.0 mg/kg。

4.2 回收率

添加浓度及其回收率的实验数据：

a)在添加2.0 mg/kg浓度水平时，苯甲酸和山梨酸的回收率分别为85.5％和85.2％;

b)在添加5.0 mg/kg浓度水平时，苯甲酸和山梨酸的回收率分别为87.8％和87.9％;

c)在添加10.0 mg/kg浓度水平时，苯甲酸和山梨酸的回收率分别为88.6％和91.6％;

d)在添加100.0 mg/kg浓度水平时，苯甲酸和山梨酸的回收率分别为94.6％和92.6％。

相关链接：进出口腐乳中苯甲酸、山梨酸含量检验方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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