1 范围

本标准规定了食品中诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的液相色谱检测方法。

本标准适用于糖果、饮料中诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的检测。

2 制样

2.1 试样制备：从抽取的原始样品中取可食部分，均匀捣碎，液体样品混匀。将样品充分混匀，分出约500g，作为试样，装入清洁容器中，标明标记。

2.2 试样保存：将试样冷藏保存。

2.3 在抽样和制样过程中，必须防止样品受到污染。

3 测定方法

3.1 方法提要

糖果、饮料中的人工合成着色剂用聚酚胺吸附法提取，过滤后，采用反相高效液相色谱技术进行分离测定，外标法定量。

3.2 试剂和材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为二次去离子水。

3.2.1 聚酰胺粉：200目。

3.2.2 乙醇-氨溶液：取1mL氨水，加入100 mL乙醇中70％。

3.2.3 甲醇-甲酸溶液：取60 mL，甲醇和40 mL甲酸混匀。

3.2.4 20％柠檬酸溶液：取200 g柠檬酸溶解于1L水中。

3.2.5 硫酸：10 mL硫酸和100 mL水混匀。

3.2.610％钨酸钠水溶液：取10g钨酸钠溶解于100 mL水中。

3.2.7 乙酸：色谱纯。

3.2.8 甲醇：色谱纯。

3.2.9 乙酸铵。

3.2.10 日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红标准品：纯度大于98％。

3.2.11 标准溶液：准确称取适量的着色剂标准品，用水配制成为1.0 mg/mL的标准储备溶液，根据需要再用水稀释，配成适当浓度的标准工作溶液。

3.3 仪器和设备

3.3.1 液相色谱仪，配有紫外检测器。

3.3.2 旋涡混匀器。

3.3.3 离心机：最大转速5000 r/min。

3.4 分析步骤

3.4.1 提取、净化

3.4.1.1 果汁和汽水等样品：取50 mL样品加热，驱除二氧化碳，然后用水稀释定容经0.45 um滤膜过滤后供液相色谱分析。

3.4.1.2 固体类样品：取已粉碎样品10g，加30 mL乙醇-氨溶液溶解，置水浴上浓缩至20 mL，用20％柠檬酸溶液调pH3.5～4.5，如需可加1 mL 10％钨酸钠溶液，使蛋白质沉淀。将上述溶液加热至70℃，加入聚酰胺粉0.5g～1.0g，充分搅拌，用20％柠檬酸溶液调pH3.5～4.5，使色素完全被吸附，以3000 r/min，离心3 min。弃去离心后所得的上层清液，用甲醇和甲酸溶液洗去天然色素，再用水洗至溶液为中性，最后用乙醇-氨溶液解析，至吸附剂为白色，收集解吸液，加乙酸中和，定容至100 mL，经0.45 um滤膜过滤后供液相色谱分析。

3.4.2 测定

3.4.2.1 色谱条件

a)色谱柱：C₁₈ 250×4.6mm(内径)，粒度5um;

b)流动相：甲醇+乙酸铵(0.02 mol/L)(5＋95)

c)梯度：甲醇20％～35％，3％/min；35％～98％,9％/min；98％～98％继续6min;

d)进样量：10uL；

e)检测波长：254 nm;

f)柱温：室温。

3.4.2.2 色谱测定

根据样品中色素的含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样品中的色素的响应值均应在仪器的检测线性范围内。取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪。在3.4.2.1色谱条件下，日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红的参考保留时间依次为7.532 min、9.291min、10.288 min、10.834 min。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。