(一)原理

样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，将样品提取液通过镉柱，使其中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子。在弱酸性条件下，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料，测得亚硝酸盐总量，根据测得还原前后亚硝酸盐量的变化即可求得硝酸盐的含量。

(二)仪器和试剂

1．试剂

(1)亚铁氰化钾溶液 称取106.Og亚铁氰化钾K4[Fe(CN)6]，用水溶解，并定容至1 000mL。

(2)乙酸锌溶液 称取220.0g乙酸锌，加30mL冰乙酸，溶于水并稀释至1000mL。

(3)饱和硼砂溶液称取5.0g硼砂钠，溶于100mL热水中，冷却后备用。

(4)氢氧化钠溶液(20 g／L) 称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1000mL。

(5)氨缓冲溶液(pH 9．6～9．7) 量取20 mL盐酸，加50mL蒸馏水，混匀后加50mL氨水，用水定容至1000mL。

(6)稀氨缓冲溶液量取50mL，氨缓冲溶液，用水定容至500mL，混匀。

(7)对氨基苯磺酸溶液(4g／L) 称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL 20％盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

(8)盐酸萘乙二胺溶液(2g／L) 称取O.2g盐酸萘乙二胺，溶解于100mL水中，混匀后，置棕色瓶中，避光保存。

(9)盐酸溶液(O.1 mol／L) 吸取5mL盐酸，用水稀释至600mL。

(10)硝酸钠标准储备液 准确称取O．123 2 g硝酸钠(已于110～120℃干燥至恒重，相当于O.1000g亚硝酸钠)，以重蒸水溶解，移于，500mL容量瓶中并定容。此液亚硝酸钠浓度为200µg／mL。

(11)硝酸钠标准使用液 临用时吸取标准液2.50mL置于100mL容量瓶中，加水定容。此液亚硝酸钠浓度为5µg／mL。

(12)亚硝酸钠标准液 准确称取O.100Og于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，用水溶解后移入500mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于200µg的亚硝酸钠。

(13)亚硝酸钠标准使用液 临用前，吸取亚硝酸钠标准液5.00mL，置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于O.5µg的亚硝酸钠。

2．仪器

(1)镉柱。

①海绵状镉的制备：投入足够锌皮或锌棒于500 mL200 g／L的硫酸镉溶液中，经3～4 h，当溶液中的镉全部被锌置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出残余锌棒，使镉沉底，倾去上层清液，以蒸馏水用倾斜法多次洗涤，然后移入组织捣碎机中，加500 mL水。捣碎约2 s，用水将金属细粒洗至标准筛上，取20～40目之间的部分。

②镉柱装填：用蒸馏水装满镉柱玻璃管，并装入2 cm高的玻璃棉作垫。将玻璃棉压向柱底，并将其中所包含的空气全部排出，在轻轻敲击下加入海绵状镉至8～10 cm高，上面用1cm高的玻璃棉覆盖，上置一个储液漏斗，末端穿过橡皮塞与镉柱玻璃管紧密连接。

如无上述镉柱玻璃管，也可用25mL酸式滴定管代用。

当镉柱填装好后，先用25 mL盐酸(O．1 mol／L)洗涤，再以蒸馏水洗2次，每次25 mL，镉柱不用时，用水封盖，保持气泡不得进入镉层。

镉柱每次使用完毕后，应先以25 mL盐酸(0.1 mol／L)洗涤，再以水洗2次，每次25 mL，最后用水覆盖镉柱。

③镉柱还原效率的测定：吸取20mL硝酸钠标准使用液于50mL烧杯中，加入5mL稀氨缓冲溶液，混匀，注入储液漏斗，使其流经镉柱还原，以原烧杯收集流出液，当储液漏斗的样液流完后，再加5mL水置换镉柱内留存的样液。

将全部收集液如前再经镉柱还原一次，第二次流出液体收集于100mL容量瓶中，继以水流经镉柱洗涤三次，每次20mL，洗涤液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混匀。

亚硝酸盐标准曲线的绘制吸取0．00、O.20、O.40、0.60、O.80、1.00、1.50、2．00、2．50 mL亚硝酸钠标准使用液(相当于O、l、2、3、4、5、7．5、10、12．5µg亚硝酸钠)，分别置于50mL具塞比色管中。分别加入2 mL对氨基苯磺酸溶液(4 g／L)，混匀，静置3～5min，加入盐酸萘乙二胺溶液(2g／L)，加水至刻度，混匀，静置15min，用2 cm比色杯，于波长538 nm处测吸光度，绘制标准曲线。

取10．O mL还原后的溶液(相当于10µg亚硝酸钠)于50mL比色管中。按标准曲线制备程序，自“分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液……”起进行操作。

将测得亚硝酸钠含量值代人下式计算还原效率。

X=A/10*100

式中：X——还原效率，％；

A——测得亚硝酸盐的含量，µg；

10——测定用溶液相当于亚硝酸盐的含量，µg。

(2)分光光度计。

(3)50 mL比色管。