一、案例

在食品加工过程中，添加适量的化学物质与食品中的某些成分发生作用，从而使食品呈现良好的色泽，这种物质称为护色剂。硝酸盐和亚硝酸盐是常用的护色剂，用于腌制香肠、腊肉、火腿时，可使肉色鲜红。但硝酸盐和亚硝酸盐对人体有一定的毒性，尤其是亚硝酸盐可转化为致癌物亚硝胺，应严格控制其使用。我国《食品添加剂使用卫生标准》规定，亚硝酸盐用于腌制肉类、肉类罐头、肉制品时的最大使用量为O.15g／kg，硝酸钠最大使用量为O.5g／kg；残留量(以亚硝酸钠计)肉类罐头不得超过O.05g／kg，肉制品不得超过0.03g／kg。

二、选用的国家标准

GB 5009．33—2010食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定——分光光度法。

三、测定方法

1．样品预处理

(1)新鲜蔬菜、水果 将整棵蔬菜或水果用去离子水洗净，凉干后，取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分法取适量，用组织捣碎机制成匀浆备用。如需加水应记录加水量。

(2)肉类、蛋、水产及其制品 用四分法取适量或取全部，用组织捣碎机制成匀浆备用。

(3)乳粉、豆乳粉、婴儿配方乳粉等固态乳制品(不包括乳酪) 将样品装入能够容纳2倍试样体积的带盖样品容器中，通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直到使样品均一化。

(4)酸乳、牛乳、炼乳及其他液体乳制品通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器使样品充分混合。

(5)乳酪取适量的样品研磨成均匀的泥浆状。为避免水分损失，研磨过程中应避免产生过多的热量。

2．提取与净化

(1)水果、蔬菜、水产、肉类、蛋类及乳酪等 称取5g(精确到0．001g)制成匀浆的试样(如制备过程中加水，应按加水量折算)，置于50mE烧杯中，加12．5mL硼砂饱和液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴加热15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。

(2)乳及乳制品(不包括乳酪) 称取5g(精确到0.001g)混匀的样品(牛乳等液态乳可取10-20g)置于50mL烧杯中，加12．5mL硼砂饱和液，搅拌摇匀，以50～60℃左右的
水约300mL将试样洗入500ml。容量瓶中，置超声波清洗器中提取20min。

(3)提取液净化在上述提取液中，一边转动，一边加入5ml。亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置0.5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。

3．亚硝酸盐的测定

吸取40.Oml,上述滤液于50mL带塞比色管中，另吸取0、0．20mL、0．40ml一、0．60mL、0．80ml一1．OOmL、1．50mL、2．OOmL、2．50ml亚硝酸钠标准使用液(相当于0、1．O／µg、2．Oµg、3．0µg、4．Oµg、5．Oµg、7．5µg、10．0µg、12．5µg亚硝酸钠)，分别置于50mL带塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入2mL对氨基苯璜酸溶液(4g／L)，混匀，静置3～5min后各加入lmL盐酸萘乙二胺溶液(2g／L)，加水至刻度，混匀，静置l5min，用2cm比色杯，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白实验。

结果计算

(1)亚硝酸盐含量的计算 以亚硝酸钠计的含量计算如下：

X1=A1*1000/m*V1/V0*1000

式中 X₁——试样中亚硝酸钠的含量，mg／kg；

A₁-——测定用样液中亚硝酸钠的质量，µg；

m——试样质量，g；

V₀——试样处理液的总体积，mL；

V₁——测定用样液的体积，mL。