7 测定步骤

7.1 提取

称取10g试样(精确到0. 01 g)置于60 mL离心管中，加入0.1mL甲酸和20 mL甲醇＋水(1+1)，于高速组织捣碎机上匀浆提取1 min，然后加入20 mL经甲醇＋水(1+1)饱和的0.0025％双硫腙三氯甲烷溶液，于振荡器上剧烈振荡10 min，以4000 r/min离心10 min，取上清液10 mL于50 mL试管中，弃去其余上清液。

往上述双硫腙三氯甲烷溶液中加入30 mL水，捣碎残渣，置于振荡器上剧烈振荡10 min，移取全部上清液于另-60 mL离心管中。重复提取一次，合并上清液，混匀，以4000 r/min离心10 min，取上清液30 mL与50 mL试管中的提取液合并，混匀。

7.2 净化

在预处理过的固相萃取柱顶部连接贮液器，移入上述试管中样液，待样液全部通过萃取柱后，加入2 mL水，弃去全部流出液。然后，将固相萃取柱在50 kPa～55 kPa的负压下抽干1h，最后用2 mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10 mL试管中，洗脱液在35℃水浴中用氮气吹干，用0.5 mL甲醇重新溶解残渣，再加入0.5 mL 0.3％甲酸溶液，摇匀后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：Inertsil. ODS-3, 5.0 um,150 mm×2.1 mm(内径)或相当者；

b)液相色谱梯度洗脱条件见表1;

c)柱温：40℃；

d)进样量：20 uL。

表1 液相色谱梯度洗脱条件

7.3.2 质谱条件

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测；

d)电喷雾电压：5500 V;

e)碰撞气压力：410 kPa;

f)雾化气压力：690 kPa;

g)气帘气压力：410 kPa;

h)辅助加热气压力：690 kPa;

i)离子源温度：700℃；

J)定性离子对、定量离子对和去簇电压(DP)、聚焦电压(FP)、碰撞气能量(CE)及碰撞室出口电压(CXP)见表2。

表2 杆菌肽的定性离子对、定量离子对、去簇电压、聚焦电压、碰撞气能量和碰撞室出口电压

7.3.3 液相色谱-串联质谱测定

用5个不同浓度的杆菌肽基质标准工作溶液分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中杆菌肽的响应值均应在仪器测定的线性范围内。杆菌肽的保留时间为8.49min。

7.4 平行试验

按上述步骤，对同一试样进行平行试验。

7.5 空白试验

除不称取试样外，均按上述分析步骤进行。

8 结果计算

杆菌肽残留量按式(1)计算：

式中：

X—试样中杆菌肽残留量，单位为微克每千克(ug/kg);

c—从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);

V—试样溶液定容体积，单位为毫升(mL);

m—最终试样溶液所代表的试样质量，单位为克(g)。

注：计算结果需拜空白值扣除。

9 精密度

本标准的精密度效据是按照GB/T 6379.1和GB/T 6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的值以95％的可信度来计算。

9.1 重复性

在重复性侧定的条件下．获得的两次独立侧试结果的绝对差值不超过重复性限r。样品中杆菌肽含量范围及重复性方程见表3。

表3 含量范圈及重复性和再现性方程

如果两次测定值的差值超过重复性限(r)，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。

9.2 再现性之

在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R。样品中杆菌肽含量范围及重复性方程见表3。

相关链接：液相色谱-串联质谱法测定猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量（一）

文章来源：《化学试剂标准汇编》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。