一、案例

紫菜营养丰富，其蛋白质含量超过海带，并含有较多的胡萝卜素和核黄素。每lOOg干紫菜含蛋白质24-28g、脂肪0．9g、碳水化合物31-50g、钙330mg、磷440mg、铁32mg，及胡萝卜素、核黄素、氨基酸等，其蛋白质、铁、磷、钙、核黄素、胡萝卜素等含量居各种蔬菜之冠，故紫菜又有“营养宝库”的美称。

二、选用的国家标准

GB／T 5009．87 2003食品中磷的测定一分光光度法。

三、测定方法

1．样品消化

称取各类食物的均匀干试样0.1～0.5g或湿样2～5g于100mL凯氏烧瓶中，加入3mL硫酸、3mL高氯酸一硝酸消化液，置于消化炉上。瓶中液体初为棕黑色，待溶液变成无色或微带黄色清亮液体时，即消化完全，将溶液放冷，加20mL水，冷却，转移至100mL容量瓶中，用水多次洗涤凯氏烧瓶，洗液合并倒人容量瓶内，加水至刻度，混匀。此溶液为试样测定液。

2．试剂空白液的制备

取与消化试样同量的硫酸、高氯酸一硝酸消化液，按同一方法制备空白溶液。

3．磷标准系列使用液的制备

准确吸取磷标准使用液0、O．5mL、1．OmL、2．OmL、3．0mL、4．0mL、5．OmL(相当于含磷量O.5µg、10µg、20µg、30µg、40µg、50µg)，分别置于20mL具塞试管中，依次加入2mL钼酸溶液摇匀，静置几秒。加入1mL亚硫酸钠溶液、1mL对苯二酚溶液，摇匀。加水至刻度，混匀。静置30min，用分光光度计在660nm波长处测定吸光度。以测定出的吸光度对磷含量绘制标准曲线。

4．测定

准确吸取试样测定液2ml。及同量的空白溶液，分别置于20mL具塞试管中，按磷标准系列使用液的制备操作步骤，依次加入各种试剂。在660nm波长处测定吸光度。在标准曲线上查得试样液中的磷含量。

5．结果计算

X=m1/m*V1/V2*100

式中 X——试样中磷的含量，mg／100g；

m₁——由标准曲线查得或回归方程算得的试样测定液中磷的质量，mg；

V₁——试样消化液定容总体积，mL；

V₂——测定用试样消化液的体积，mL；

m——试样的质量，g。

6．试剂

①浓硫酸：相对密度1.84。

②15％硫酸溶液：取15mL硫酸徐徐加入到80mL水中混匀。冷却后用水稀释至100mL。

③混合酸：硝酸+高氯酸=4+l。

④钼酸铵溶液：称取0．5g钼酸铵[(NH4)6 MO7O24·4H20]用15％硫酸稀释至100mL。

⑤对苯二酚溶液：称取0．5g对苯二酚于100mL水中，使其溶解，并加入一滴浓硫酸(减缓氧化作用)。

⑥亚硫酸钠溶液：称取20g无水亚硫酸钠于100mL水中，使其溶解。此溶液需于试验前临时配制，否则可使钼蓝变混浊。

⑦磷标准储备液(100Hg／mL)：精确称取在105℃下干燥的磷酸二氢钾(优级纯)0．4394g，置于1000mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。

⑧磷标准使用液(10µg／mL)：准确称取10mL磷标准储备液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

7．仪器

分光光度计。