(二)第二法(显微计数法)

显微计数法是将一定体积的供试液滤过，使所含不溶性微粒留在微孔滤膜上，在100倍显微镜下，用经标定的目镜测微尺分别测定其最长直径在10um及10um以上和25um及25um以上的微粒，根据过滤面积上的微粒总数，计算出供试液每1 ml或每个容器)中含不溶性微粒的数量。

1．实验环境及仪器

(1)实验环境：实验室操作所处环境应不得引入外来微粒，可以在具高效空气过滤器(孔径0.45um)的洁净工作台或符合要求的洁净实验室中进行。玻璃仪器和其他所需的用品都应洁净。本法所用微粒检查用水(或其他适宜溶剂)，使用前须经不大于1.0um的微孔滤膜滤过。

(2)显微镜：双筒大视野显微镜，目镜内附标定的测微尺(每格5～10um)。坐标轴前后、左右移动范围均应大于30mm，显微镜装置内附有光线投射角度、光强度均可调节的照明装置。检测时放大100倍。

(3)镜台测微尺：用于目镜测微尺的标定。

(4)微孔滤膜：白色，孔径0.45um、直径25mm或13mm，一面印有间隔3mm的格栅；膜上有10um及10um以上的不溶性微粒，应在5粒以下，并不得有25um及25um以上的微粒，必要时，可用微粒检查用水冲洗使符合规定。

2．操作方法

(1)供试品检查前的准备：在洁净工作台上将滤器用微粒检查用水(或其他适宜溶剂)冲洗至洁净，用平头无齿镊子夹取测定用滤膜，用微粒检查用水(或其他适宜溶剂)冲洗后，置滤器托架上；固定滤器，倒置，反复用微粒检查用水(或其他适宜溶剂)冲洗滤器内壁，控干后安装在抽滤瓶上，备用。

(2)标示装量为25 ml或25m1以上的静脉用注射液或注射用浓溶液：除另有规定外，取供试品至少4个，分别按下法测定，用水将容器外壁洗净，在洁净工作台上小心翻转20次，使溶液混合混匀，立即小心开启容器，用适宜的方法抽取或量取供试液溶液25 ml ,沿滤器内壁缓缓注入经预处理的滤器(滤膜直径25mm)中。静置1分钟，缓缓抽滤至滤膜近干，再用微粒检查用水25 ml，沿滤器内壁缓缓注入，洗涤并抽滤至滤膜近干，然后用平头镊子将滤膜移至平皿上(必要时，可涂抹极薄层的甘油使滤膜平整)，微启盖子使滤膜适当干燥后，将平皿闭合，置显微镜载物台上。调好入射光，放大100倍进行显微测量，调节显微镜至滤膜格栅清晰，移动坐标轴，分别测定有效滤过面积上最长粒径在10um以上和25um以上的微粒数。计算供试品测定结果的平均值。

(3)标示装量为25 ml以下的静脉注射液或注射用浓溶液：除另有规定外，取供试品至少4个，用水将容器外壁洗净，在洁净工作台上小心翻转20次，使混合均匀，立即小心开启容器，用适宜的方法直接抽取每个容器中的全部溶液，沿滤器内壁缓缓注入经预处理的滤器(滤膜直径13mm)中，照上述(2)同法测定。

(4)静脉注射用无菌粉末及供注射用无菌原料药：除另有规定外，照光阻法“2．操作方法”中的(5)或(6)制备供试品溶液，同上述(2)操作测定。

3．注意事项

(1)各种形状的微粒应以实测到的最长粒径计算，重叠微粒和聚合胶体微粒均以单个微粒计数。

(2)必要时可另取微粒检查用水(或其他溶剂)25ml照前述(2)项下自“沿滤器内壁缓缓注入，洗涤并抽滤至滤膜近干”起，依法操作，此项空白试验仅可视作对操作环境、实验用具的认证，所得数据不必在供试品检查结果中扣除，但对检测结果的正确与否有密切关系。此项试验必须检测全滤膜，达到要求后方可进行样品检测。

(3)本法不适用与乳液型和混悬型注射剂，对于黏度过高者，光阻法和本法均无法测定时，可用适宜的溶剂经适量稀释后测定。

(4)供试品的检查数量：为确保检查结果具有统计学意义，除另有规定外，一般应取供试品4瓶(支)以上进行不溶性微粒检查。

4．结果与判定

(1)标示装量为100ml或100ml以上的静脉注射液：除另有规定外，每1ml中含10um及10um以上的微粒不得过12粒，含25um及25um以上的微粒不得过2粒。

(2)标示装量为100ml以下的静脉用注射液、静脉注射用无菌粉末、注射用浓溶液及供注射用无菌原料：除另有规定外，每个供试品容器(份)中含10um及10um以上的微粒不得过3000粒，含25um及25um以上的微粒不得过300粒。

文章来源：《实用化学药品检验检测技术指南》

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