1 测量方法

药物中的聚合物指药物中分子量大于药物本身分子量的杂质的总称。抗生素中的聚合物杂质是引发抗生素药物过敏反应的真正过敏原，严格控制抗生素药物中高分子聚合物的含量有着重要的意义。由于阿莫西林中的聚合物对照品难以制备，因此利用青霉素对照品在纯水流动相中主成分缔合物作对照(阿莫西林，青霉素＝1：10)，取代阿莫西林对照品对阿莫西林胶囊聚合物进行检测，而在磷酸盐缓冲液作为溶剂及流动相的情况下，阿莫西林相对不易聚合，因而在此条件下测定样品中聚合物的含量。

1.1依据文件

《中国药典》2010年版二部第403页“阿莫西林胶囊【检查】阿莫西林聚合物”(与《中国药典》2015年版二部568页“阿莫西林胶囊【检查】阿莫西林聚合物”相同)

《中国药典》2010年版二部第402页“阿莫西林【检查】阿莫西林聚合物”【与《中国药典》2015年版二部第567页“阿莫西林【检查】阿莫西林聚合物”测量方法相同(2015版对限界的要求提高了，但对不确定度评定程序没有影响)］

《中国药典》2010年版二部附录37页“VH分子排阻法”(与《中国药典》2015年版四部第62页“0514分子排阻色谱法”相同)

1.2实验条件

KGF-1抗生素高聚物分析系统(上海金达生化仪器有限公司)，定量重复性限：3％(按广东省计量科学研究院的校准证书)；

METTLER TOLEDO XPE205 DR分析天平，最大秤量：81g/220g，d=0.01mg/0.1mg，e=0.1mg/1mg，81g量程，0g～5 g范围，MPEV=0.5e=0.05mg; 220g量程，0g～50g范围，MPEV=0.5e=0.5mg;

样品：阿莫西林胶囊(中诺药业(石家庄)有限公司，批号：324140608，规格：0.25g) ;

对照品：青霉素(按青霉素C₁₆H₁₈N₂O₄S计含量：93.1％，批号：130437-201306，中国食品药品检定研究院)；

蓝色葡聚糖2000;

2％无水碳酸钠；

室温：(20±5)℃；湿度：50％～60％。

1.3测定步骤

1.3.1色谱条件

色谱柱：葡萄糖凝胶G10(10um～120um)，玻璃柱内径：1.4cm，柱长39cm，流动相A:pH8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液[(0.05mol/L磷酸氢二钠溶液-0.05mo1/L磷酸二氢钠溶液(95:5)]，流动相B：水；流速：1.5mL/min，检测波长：254nm，进样量:200uL。

1.3.2实验操作流程

实验操作具体流程见图1,各详细操作步骤如下：

①系统适用性试验。取0.2mg/mL蓝色葡聚糖2000溶液200uL注入液相色谱仪，分别以流动相A、B为流动相进行测定，记录色谱图。按蓝色葡聚糖2000峰计算理论板数均不低于500，拖尾因子均应小于2.0。在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值应在0.93～1.07，对照溶液主峰和供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值均应在0.93～1.07。称取阿莫西林约0.2g置10mL量瓶中，加2％无水碳酸钠溶液4mL使溶解后，用0.3mg/mL的蓝色葡聚糖2000溶液定容至刻度，摇匀。量取200uL注入液相色谱仪，用流动相A进行测定，记录色谱图。高聚体的峰高与单体与高聚体之间的谷高比应大于2.0。另以流动相B为流动相，精密量取对照溶液200uL，连续进样5次，峰面积的相对标准偏差应不大于5.0％。本案例中实验系统适用性全部符合要求。

图1 阿莫西林聚合物测量操作流程

②取青霉素对照品W_s约10mg(实测：0.01024g，取表1中第一次测量数据，以下同)，用蒸馏水溶解至50mL(V_s)容量瓶，作为对照品溶液。

③对照品溶液在流动相B中连续进5次对照品溶液，取峰面积(日常实验使用系统适用性试验中的五针对照品峰面积)平均值作为对照品峰面积A_s(136163.1uV·s)。

④取20粒阿莫西林胶囊，分别称取内容物重量，计算其平均值，作为平均装量W_a(0.29721g)。取上述胶囊内容物W_t(0.2398g)约相当于阿莫西林0.2g)，加2％无水碳酸钠溶液5mL使溶解，并用水定容至10mL(V_t)容量瓶，滤过，作为供试品溶液。

⑤供试品溶液在流动相A中进1次供试品溶液，将峰面积作为供试品峰面积A_s(25355.2uV·s)。

⑥按式(1)计算阿莫西林胶囊聚合物含量百分比：

式中：

X—样品中阿莫西林聚合物含量，％；

W_s—对照品取样量，g；

P—对照品纯度，P=93.1％；

V_s—对照品容量瓶体积，V_s=50mL;

A_t—供试品峰面积，uV·s；

V_t—供试品容量瓶体积，V_t=10mL;

A_s—对照品峰面积。uV·s;

10—阿莫西林：青霉素＝1:10，无量纲；

W_t—供试品取样量，g；

W_b—标示量，0.25g，视为常数；

W_a—平均装量，g;

100％—使阿莫西林聚合物的含量以百分比表示的转换因子，无量纲。

阿莫西林胶囊检查项下阿莫西林聚合物检查规定含阿莫西林聚合物以阿莫西林计，不得超过0.2％。此项检查符合规定。

由于系统适用性试验只是用于验证高聚物分析系统和色谱柱是否达到实验要求，不代入计算，结果不影响最终测量值，故系统适用性试验环节无需进行测量不确定度分量的评定。而为保证实验的稳定性以及结果的可靠性和准确性，在实验过程中不间断地进行系统适用性试验。同时对照品峰面积均采用系统适用性试验中对照品连续五次进样峰面积的平均值作为对照品峰面积，可检测仪器的重复性是否达到要求。

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文章来源：《食品药品检测测量不确定度评定实例》

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