甜味剂是以赋予食品甜味为主要目的的食品调味剂。其分类有多种方法，按其营养价值分为营养性甜味剂和非营养性甜味剂；按其化学结构和性质分为糖类和非糖类甜味剂；按其来源分为天然甜味剂和化学合成甜味剂。合成甜味剂是人工合成的非营养性甜味剂。糖精钠、甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)、安赛蜜(乙酰磺胺酸钾)和阿斯巴甜属于化学合成甜味剂。

一、食品中糖精钠的测定

食品中糖精钠的测定采用液相色谱法，按照GB/T 500928-2016的规定与食品中苯甲酸、山梨酸同时测定。

(一)测定原理

样品经水提取，高脂肪样品经正己烷脱脂，高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白，采用液相色谱分离、紫外检测器检测，外标法定量。

(二)试剂和仪器

1.试剂

(1)氨水、无水乙醇、正己烷。

(2)亚铁氰化钾｛K₄[Fe(CN)₆]·3H₂O}。

(3)乙酸锌[Zn(CH₃COO)₂·2H₂O]。

(4)甲醇、乙酸铵和甲酸(色谱纯)。

(5)氨水溶液(1+99)取氨水1mL，加到99mL水中，混匀。

(6)亚铁氰化钾溶液(92/L) 称取106g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至1000mL。

(7)乙酸锌溶液(183g/L)称取220g乙酸锌溶于少量水中，加入30 mL冰乙酸，用水定容至1000 mL。

(8)乙酸铵溶液(20mmol/L)称取1.54g乙酸铵，加入适量水溶解，用水定容至1000mL，经0.22um微孔滤膜过滤备用。

(9)甲酸-乙酸铵溶液(2mmol/L甲酸+20mmol/L乙酸铵)称取1.54g乙酸铵，加入适量水溶解，再加入75.2uL甲酸，用水定容至1000 mL，经0.22 um微孔滤膜过滤备用。

2．标准品

糖精钠(C₆H₄CONNaSO₂·2H₂O，纯度≥99%)；苯甲酸钠(C₆H₅COONa，纯度≥99%)或苯甲酸(C₆H₅COOH，纯度≥99%); 山梨酸钾(C₆H₇KO₂，纯度≥99%)或山梨酸(C₆H₈O₂，纯度≥99%)。

(1)糖精钠标准储备液(1000mg/L)准确称取经120℃烘干4h后的糖精钠0.117g(精确到0.0001)，加水溶解定容至100mL。于4℃贮存，保存期为6个月。

(2)苯甲酸、山梨酸标准储备液(1000mg/L)分别准确称取苯甲酸钠、山梨酸钾0.118g和0.134g(精确到0.0001g)，加水溶解定容至100mL。于4℃贮存，保存期为6个月。当使用苯甲酸和山梨酸标准品时用甲醇溶解并定容。

(3)糖精钠(以糖精计)、苯甲酸、山梨酸混合标准中间溶液(200mg/L )分别准确吸取糖精钠、苯甲酸和山梨酸标准储备液各10mL于50mL容量瓶中，用水定容。于4℃贮存，保存期为3个月。

(4)糖精钠(以糖精计)、苯甲酸、山梨酸混合标准系列工作溶液分别准确吸取上述混合标准中间溶液0、0.05、0.25、0.50、1.00、2.50、5.00、10.0mL，用水定容至10mL，配制成浓度分别为0、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100、200mg/L的混合标准系列工作溶液，临用现配。

3. 仪器

(1)高效液相色谱仪配紫外检测器。

(2)分析天平感量为0.001g和0.0001g。

(3)涡旋振荡器；匀浆机；恒水浴锅；超声波发生器。

(4)离心机转速＞8000r/min。

(三)测定步骤

1.取样

均匀的饮料、液态奶等样品，取多个预包装样品直接混合；非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆；固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀；奶酪、黄油、巧克力等采用50～60℃加热熔融，并趁热充分搅拌均匀。取均匀后的样品200g装入玻璃容器中，密封，液体试样于4℃保存，其他试样于-18℃保存。

2．样品处理

(1)一般性试样准确称取约2g(精确到0.001g)试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL,涡旋混匀，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL,混匀，于8000r/min离心5min，将水相转移至50mL容量瓶中，于残渣中加水20mL,涡旋混匀后超声5 min，于8000r/min离心5 min，将水相转移至同一个50mL容量瓶中，用水定容，混匀。取适量上清液过0.22um滤膜，待测。(注：碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等测定时可以不加蛋白沉淀剂)。

(2)含胶基的果冻、糖果等试样准确称取约2g(精确到0.001g)试样于50mL具塞离心管中，加水约25 mL,涡旋混匀，于70℃水浴加热溶解试样，于50℃水浴超声20 min,之后操作同(1)。

(3)油脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂试样准确称取约2g(精确到0.001g)试样于50mL具塞离心管中，加正己烷10mL，于60℃水浴加热约5 min，并不时轻摇溶解脂肪，然后加氨水溶液25mL，乙醇1mL,涡旋混匀，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后，加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL,混匀，于8000r/min离心5 min，弃去有机相，水相移至50 mL容量瓶中，残渣操作同(1)再提取一次后测定。

3. 色谱参考条件

(1)色谱柱C₁₈柱，柱长250mm，内径4.6mm,粒径5um，或等效色谱柱。

(2)流动相甲醇+乙酸铵溶液＝5+95；流速：1 mL/min；检测波长：230nm；进样量：10uL。

当存在干扰峰或需要辅助定性时，可以采用加入甲酸的流动相来测定，如流动相：甲醇+甲酸-乙酸铵溶液=8 +92。

4．标准曲线的制作

将混合标准系列工作液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以混合标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

5．试样溶液的测定

将试样溶液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中糖精钠(以糖精计)、苯甲酸和山梨酸的质量浓度。

(四)结果计算

式中X—样品中待测组分含量，g/kg;

P—由标准曲线得出的试样液中待测物的质量浓度，mg/L;

V—试样定容体积，mL ;

m—试样质量，g;

1000—由mg/kg转换为g/kg的换算因子。

计算结果保留3位有效数字。精密度要求在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

按取样量2g，定容50mL时，糖精钠、苯甲酸和山梨酸的检出限均为0.005g/kg，定量限均为0.01g/kg。

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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