北京普天同创生物科技有限公司
中药是一个复杂的体系,中药的分析检验一直是较难和繁杂的工作。近年来,中药质量标准正走向规范化,适用于中药制剂多成分、多指标检测等检验方法在逐步制定和规范,先进可行的技术已引入中药质量控制检测中,如HPLC法在中药分析中的应用已越来越广泛。
1.含量测定
值得注意的是,作为含量测定的首选方法,中国药典各论中原先采用薄层色谱方法和其它定量方法逐渐被HPLC法所取代。
以人参含量测定为例:
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A;以水为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rg1,峰计算应不低于6000。
对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg,对照品,人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1,对照品,加甲醇制成每lml各含0.2mg的混合溶液,摇匀,即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约lg,精密称定,置索氏提取器中,加三氯甲烷加热回流3小时,弃去三氯甲烷液,药渣挥干溶剂,连同滤纸筒移人100ml锥形瓶中,精密加水饱和正丁醇500ml,密塞,放置过夜,超声处理(功率250W,频率50kHZ)30分钟,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液25ml,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至5m1量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液10μ1与供试品溶液10~20μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品按干燥品计算,含人参皂苷Rg1(C42H72014)和人参皂苷Re(C48H82018)的总量不得少于0.30%,人参皂苷Rb1(C54H92O23,)不得少于O.20%。
讨论:①人参皂苷Rg1和人参皂苷Re极性相近,但和人参皂苷Rbt极性相差较大,如采用等度洗脱方法,人参皂苷保留时间会较长,采用梯度洗脱既可以较好地分离,又可缩短分析时间。
②本法最好采用自动进样器进样,外标法也可达较好的定量效果。
③人参皂苷是三萜类化合物,在紫外区没有吸收,故选择紫外末端吸收波长203nm处测定。
④由于利用的是末端吸收,所以采用乙腈作为流动相,如用甲醇等溶剂,则干扰测定。
2.中药指纹图谱研究
中药指纹图谱是中药现代化的关键点,能很好地体现中药制剂的均一性,将促进更多的人理解和使用中药及其制剂,中药指纹图谱建立,为中药质量控制提供了的一个新的重要方法。在众多的研究指纹图谱的色谱和光谱方法中,HPLC法是最为重要的、也是最为广泛应用的方法之一。
色谱条件与系统适用性实验 色谱柱:Kromasil C18 100A 250mm×4.6mm;流动相:A相:0.1%甲酸一甲醇(90:10),B相:甲醇一乙腈一0.1%甲酸(50:30:20),流速:lmL/min;按下表进行梯度洗脱程序。
理论板数按表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG计算应不低于3000。检测波长280nm;柱温:30℃。
参照物溶液 精密称取表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG对照品适量,加流动相A相配制成浓度为40μg/mL的溶液。
供试品溶液 茶多酚注射剂用流动相A相稀释1000倍后,直接进样。
测定法 分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪,记录色谱图,供试品色谱图中应有如标准指纹图谱(根据多批样品测定数据确定)所标示的11个色谱峰;采用夹角余弦法,计算与标准指纹图谱的相似度,应不低于0.9。
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