一、水解蛋白质中氨基酸的分析

1．方法原理

氨基酸为含有氨基和羧基的双官能团化合物，它在全多孔阳离子交换树脂上进行离子交换分离，柱后用茚三酮衍生化后进行检测，用缓冲溶液作流动相进行洗脱分离。如图9-74所示。

图9-74  水解蛋白中氨基酸H PLC谱图
1-天冬氨酸(ASP) ; 2-苏氨酸(Thr) ; 3-丝氨酸(Ser) ; 4-谷氨酸(Glu);
5-脯氨酸(Pro)；6-甘氨酸(Gly)；7-丙氨酸(Ala)；8-胱氨酸(Cvs)；
9-缬氨酸(Val)；10-蛋氨酸(Met)；11-异亮氨酸(Ile)；12-亮氨酸
(Leu)；13-酪氨酸(Tyr)；14一苯丙氨酸(Phe)；15一赖氨酸(Lys)；
16-氨；17-组氨酸(His)；18-精氨酸(Arg)

2．色谱分析条件

(1)色谱柱Aminex A5树脂(10～15um), Li型，φ9mm×30cm，△p＝3.0MPa。

(2)流动相柠檬酸锂缓冲溶液(PH=3.0～4.0)，1mL/min。

(3)检测器可变波长UVD, 570nm。

3．分析结果

分析结果用归一化法进行定量分析。

二、两性表面活性剂壬基酚聚氧乙烯醚的组成分析

1．方法原理

以全多孔硅胶为固定相，以正己烷为流动相主体，以2-丙醇、乙醇、水作改性剂，进行线性梯度洗脱，以UVD作检测器，测定含不同EO(环氧乙烷)数的壬基酚聚氧乙烯醚的组成。

2．色谱分析条件

(1)色谱柱φ4.6mm×20cm, Si-100, d_p=5um，柱温30℃。

(2)流动相A为正己烷-2-丙醇(体积比为40：60) ; B为80％乙醇水溶液。在0～45min内，流动相中B组分含量从10％增至95％并保持至50min。

(3)检测器UVD (280nm)。

3．分析结果

分析结果如图9-75所示。

图9-75  两性表面活性剂壬基酚聚氧乙烯醚的分析
15,20,25,30,35,40,45,50为其分子中所含EO数

三、吡啶衍生物的HILIC分析

1．方法原理

吡啶的衍生物皆为强极性的有机小分子化合物，可用HILIC方法分析，并实现完全分离。

2．色谱分析条件

色谱柱：Atlantic HILIC硅胶柱，φ94.6×150mm, 3um。

流动相：A0.1％磷酸水溶液；B乙腈。

梯度程序：0～7min; B从95％→60％；8～13min; B 60％。

检测器：UVD (210nm)

3．分析结果

分析结果用归一化法进行定量分析。谱图见图9-76。

图9-76  吡啶衍生物的HILIC分离谱图
1-2-吡啶羧酸(pK1 1.01，pK2 5.29)；2-3-吡啶羧酸(pK1 2.07，pK2 4.75)；
3-4-吡啶羧酸(pK1 1.84，pK2 4.84)；4-2-吡啶酰胺(pK 1.80)；
5-3-吡啶酰胺(pK 3.33)；6-4-吡啶酰胺(pK 3.61)；7-2，6-吡
啶二甲醇(pK 4.79); 8-6-甲基-乙-吡啶甲醇(pK 5.73);
9-2-吡啶乙醇(pK 5.17)