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高效液相色谱仪的组成及其工作原理

发布时间:2013-12-17 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:2851

    高效液相色谱仪(high performance liquid chromatograph)通常由储液瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据处理系统等部分组成。储液瓶一般用玻璃、不锈钢或特种塑料聚醚酮等材料做成,用于存放流动相。高压输液泵的作用是将流动相以稳定的流速或压力输送到色谱系统。进样器的作用是将样品定量瞬间注入色谱柱的上端填料中心,使样品集中成一点。色谱柱是色谱仪的核心部件,它将试样混合物分离成单一组分。检测器用于检测被色谱柱分离的样品组分及其含量。数据处理系统又称色谱工作站,它可对分析的全过程(分析条件、仪器状态、分析状态)进行在线显示,自动采集、处理和存储分析数据。其中,输液泵、色谱柱和检测器是高效液相色谱仪的三大关键部件,下面将分别进行简要介绍。

    输液泵又称高压泵(high pressure pump),它的作用是输送流动相通过整个色谱系统。根据输出液体的要求,输液泵可分为恒压泵和恒流泵两大类。输液泵应具备以下特点:泵体结构材料能抗化学腐蚀,无脉冲或安装有脉冲抑制器,泵流量恒定,流量可自由调节,一般流量误差RSD在2%~3%以内,耐高压,泵腔体积小,密封性能好等。

    色谱柱是高效液相色谱仪的核心部件,它由柱管、接头和过滤片等零件组成,柱管内填有几个微米大小的颗粒填料,即固定相。色谱柱按规格可分为分析型和制备型两类。分析型色谱柱又可分为常量柱(内径2~6mm,柱长10~30cm)、半微量柱(内径1~1.5mm,柱长10~20cm)、毛细管柱(内径0.05~1mm,柱长3~10cm)。制备型色谱柱的内径通常为20~40mm,柱长为10~30cm。为了延长分析柱内固定相的使用寿命,常常在分析柱前连接一支长为3~5cm的保护柱,其内径与分析柱的一致,填充料为粒径稍大于分析柱的同类型固定相。

    色谱柱的分离效率,即柱效,主要取决于柱填料(固定相)的性能和装柱技术。关于这方而的内容,请参阅相关的文献。

    检测器是用来检测经色谱柱分离后的流出物组成和含量变化的装置。理想的检测器应具有灵敏度高、重现性好、响应快、峰形好、线性范围宽、适用范围广、死体积小、对流动相流量和温度波动不敏感等特性。高效液相色谱仪检测器通常分为通用型检测器和选择性检测器两类。通用型检测器是指检测器响应值的大小仅与色谱柱流出液中溶质量的多少相关的检测器。例如,示差折光检测器(differential refractive index detector,DRD)、蒸发光散射检测器(evaporative light scattering detector,ELSD)等。选择性检测器是根据流动相中溶质的某种特性,如紫外、荧光等特性,专门设计的一类检测_器。例如,紫外光度检测器(ultraviolet photometric detector,EPD)、荧光检测器(fluorescence detector,FD)、电化学检测器(electrochemical detector,ECD)、化学发光检测器(chemiluminescence detector,CLD)等。下面对这几种检测器的工作原理进行简要介绍。

    示差折光检测器(DRD)通过连续监测参比池和测量池中溶液折射率的差异来测定物质的浓度,几乎是一种通用型浓度检测器。

    蒸发光散射检测器(ELSD)是将从色谱柱流出的流动相及其中的样品组分引入雾化室中,样品组分在雾化气体作用下形成气溶胶,含溶质的微小颗粒在强光照射下产生光散射,散射光强度与组分的量成正比。该检测器主要用于糖类、高分子化合物、高级脂肪酸、磷脂、微生物、氨基酸、甘}由三酯及甾体等的检测,属于新型通用检测器。

    紫外光度检测器(UPD)是HPLC应用最广的检测器,它可以对那些在紫外、可见光波长下有吸收的物质进行测定,具有灵敏度高、线性范围宽、对流动相的流速和温度变化不敏感、噪声低、易于操作、不破坏样品、能与其他检测器串联等优点。

    荧光检测器(FD)是利用某些溶质在受紫外光激发后,能发射可见光(荧光)的特性来实现检测的一种检测器。FD对痕量分析非常理想,主要用于多环芳烃、生物素、维生素、氨基酸和真菌毒素等的分析。

电化学检测器(ECD)是基于待检测组分在某些介质中电离后电导的变化来实现分析的检测器。

化学发光检测器(CLD)是将从色谱柱中流出的组分与发光试剂混合后,发生化学发光反应。其光强度与组分浓度成正比的原理来实现检测的一种检测器。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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