DNA合成常用来代表细胞增殖的快慢。³H-胸腺嘧啶脱氧核苷(³ H-TdR）或者3H-脱氧胞苷(³H-dCyd)是其常用的前体物。细胞由于药物或者毒物的作用受到损伤也可表现在DNA合成受到抑制，通过测定细胞DNA的合成情况，可知药物或毒物对细胞的毒性作用。通常³H掺入法测定细胞DNA合成。³H可掺入到细胞DNA分子中，DNA合成越旺盛，则掺入到DNA分子中也越多，通过测定细胞DNA的放射性活度可检测细胞DNA的合成。

【材料】

1. 24孔培养板培养的待测细胞和对照细胞。

2．闪烁液。将4g的2,5-二苯噁唑(PPO）和200mg的1,4-双-（5-苯噁唑-2）苯（popop )溶于甲苯1000ml中。

3. 0.6M的三氯醋酸（TCA)。每毫升的培养基加入6ml的三氯醋酸（TCA )，然后放置于冰上。

4. HBSS或PBSA。放置冰上，每毫升培养基用2m1。

5. 2mo1/L的高氯仿或者0.3 M的NaCl，含35mmol/L十二烷基硫酸钠（SDS,SLS)，每毫升培养基用0.5 ml。

6. MeOH。每毫升培养基用I ml。

7．³ H标记的胸腺嘧啶核苷(³ H-TdR),0.25N过氯酸、15％乙醇、无水乙醇。液体闪烁计数器、49型玻璃纤维滤膜、闪烁瓶。

【方法】

1．培养细胞至对数期，通常DNA合成最高的时期是中对数期。

2．加入³H-TdR，溶于HBSS，浓度为40kBq/ml或2 MBq/mmol。

3．按照实验需要温育细胞1～24小时。

4．小心取放射性培养基，放到适当的液态放射性废弃物的容器中。

5．用2ml HBSS或PBSA小心地清洗细胞，然后加入2ml冰上预冷的0.6mol/L TCA，静置10分钟。如果细胞松散地黏附，则用McOH固定细胞。

6．用三氯醋酸轻轻地清洗细胞2次，每次5分钟。

7．加入0.5mol/L高氯仿，置60℃热板上30分钟，然后冷却。或者加0.5 ml溶在NaOH中的SLS，然后温育30分钟，或者在室温中过夜。

8．收集可沉性沉淀物，将其转移到闪烁液中，加闪烁液5ml，用液体闪烁计数器进行闪烁计数，记录各组细胞每分钟脉冲数（epm)。

【结果与分析】

计算细胞DNA相对合成率（％），见公式13-2：

DNA相对合成率越高，则细胞毒性越小；;DNA相对合成率越低，则细胞毒性越大。

【注意事项】

³H-TdR是一种特殊的有害物质，因此要小心避开偶然的摄入、注入或者以气溶胶的形式进入体内，当用³H-TdR时要在生物伤害防护罩中进行，或者在开放的边台上进行，而且也要注意放射性废弃物的处理。