鉴定病毒方法很多，常用的有中和试验（Neutralization test,NT)、红细胞凝集抑制试验、补体结合试验及ELISA等方法，其中中和试验最准确，具特异性。中和试验原理是因为中和抗体能阻抑相应病毒的增殖，故中和试验是通过预先将抗体和病毒在试管内反应后再接种细胞或动物、鸡胚来鉴定病毒的特异性。中和试验可用已知的抗体（免疫血清）来鉴定未知病毒，也可用已知病毒检查患者血清中相应抗体的效价。最常用的是细胞培养法，包括细胞病变法和蚀斑减少法。本实验是用已知麻疹病毒抗血清来鉴定分离的病毒。

【材料】

1．病毒待鉴定病毒。

2．细胞多瓶培养成层Vero细胞。

3．麻疹病毒抗血清自制或市售成品均可。

4．细胞生长液含10％胎牛血清（FCS)的RPMI 1640或MEM培养液。

5．维持液含2% FCS的RPMI 1640或MEM培养液。

6．消化液0.02% EDTA和0.25％胰蛋白酶1:1混合液。

7. Hanks液。

8．无菌吸管（5 ml和l ml)、培养瓶（5 ml和l0ml )，移液器及无菌移液吸头等。

【方法】

1．细胞培养常规培养Vero细胞。倒置显微镜下选择生长成单层的Vero细胞1瓶，用室温的0.02% EDTA或0.25%胰蛋白酶消化细胞5～15分钟后倒掉，加入2倍量含10% FCS的MEM（或RPMI 1640)生长液吹打细胞，使细胞分散，分装成二瓶，瓶盖不要拧得太紧，37℃,5% CO₂孵箱培养24～48小时细胞即可形成单层，此时接种病毒最适宜。

2．中和病毒将抗血清按中和效价浓度稀释（一般用40中和单位）。取稀释的抗血清加入等量待检病毒液混合，摇匀后置37℃水浴中作用1小时。

3．接种病毒取生长良好的培养细胞，倒掉培养液，将作用后的病毒混合液接种于已生长为单层培养细胞瓶内，每瓶0.2m1。同时设正常细胞对照（加0.2m1 Hanks液）和病毒对照（不加抗血清）。37℃吸附1小时，每15分钟摇动1次使病毒液均匀接触细胞。吸附后加入适量维持液，置37℃,5% CO₂孵箱培养，逐日观察细胞病变情况。

【结果】

逐日观察结果。培养2～3天后，如果正常细胞对照无CPE，病毒对照细胞出现CPE，而抗血清和病毒混合液却与正常对照相同，即无细胞病变，则说明抗血清和待检病毒发生了特异性中和反应，使病毒失去感染能力，证明待检病毒与已知抗血清相对应。

【注意事项】

1．特异抗血清要预先测定其中和效价。

2．实验时要同时设定细胞对照和病毒对照，以便对比观察结果。