(1）原理  氧化酶也称细胞色素氧化酶，是细胞色素呼吸酶系统的终端呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化生成氧化型细胞色素C，后者再使对苯二胺氧化，生成有色的醒类化合物。酉昆类化合物可以进一步与a-蔡酚反应形成细胞色素蓝，呈蓝色或蓝紫色。

细胞色素c氧化酶即细胞色素a3，有些细菌的细胞色素。和细胞色素d也具有此反应，与细胞色素a：统称为氧化酶，因此我们测定的试验应称为氧化酶试验。细胞色素d一般存在于肠杆菌科等革兰氏阴性菌生长的对数期。细胞色素。存在于肠杆菌科等革兰氏阴性和自养细菌中。

(2）试剂氧化酶试剂为1%盐酸四甲基对苯二胺或1％盐酸二甲基对苯二胺。1%盐酸四甲基对苯二胺或盐酸二甲基对苯二胺水溶液为无色溶液，在空气中易被氧化而失效，故应经常更换新试剂，并盛于棕色瓶中。四甲基对苯二胺在冰箱中可以存1周，二甲基对苯二胺氨容易氧化，在冰箱中可存2周，转红褐色时不宜使用。四氨基对苯二胺的效果更好，不需要a-萘酚，直接变成蓝色。阳性者30s内变蓝。

(3)试验方法常用方法有三种。

①菌落法：直接滴加试剂于被检菌菌落上。

②滤纸法：取洁净滤纸条，蘸取菌落少许，加氧化酶试剂1滴，lmin内观察结果。

③试纸条法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂条，取菌涂于试剂纸上。

氧化酶试验试纸条制作：将1.Og四甲基对苯二氨和0.1g抗坏血酸溶解于l00mL蒸馏水中把普通滤纸剪成许多pH试纸大小的纸条，浸于此溶液中。取出浸好的纸条放在干净托盘，35℃温箱中干燥后放在棕色瓶中，冰箱保存。

注意事项：铁、镍铬丝等金属可催化二甲基对苯二胺呈红色反应，若用它来挑取菌苔，会出现假阳性，故试验时必须用铂金丝、玻璃棒或牙签来挑取菌苔。本试验最好在滤纸上涂上菌落试验，以免培养基成分的干扰。在滤纸上滴加试剂，以刚刚打湿滤纸为宜。如滤纸过湿，会妨碍空气与菌苔接触，从而延长了反应时间，造成假阴性。

(4)结果当使用二甲基对苯二胺为氧化酶试剂时，细菌与试剂接触立即变粉红色，并逐渐加深，10s内呈深紫色，为阳性（＋）；无色为阴性（－）。

共再加α－萘酚溶液1滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于2min内不变色。为保证结果的准确性．分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希氏菌作为阳性和阴性对照。

(5)应用氧化酶试验是区分肠杆菌科和弧菌科细菌的重要试验，前者为阴性（－），后者为阳性（＋）。另外也可用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，后者为阳性。也用于奈瑟菌属的菌种鉴定，该属细菌呈阳性反应。