(1)原理  硝酸盐（nitrate）还原反应包括两个过程：一是在合成过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的最终受氢体。能使硝酸盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还原性产物。但硝酸盐还原的过程因细菌不同而异，有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐．如大肠埃希氏菌；有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假单胞菌等。

硝酸盐还原试验是指有些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨或氮气等，亚硝酸与对氨基苯磺酸作用，形成重氮苯磺酸，再与a-蔡胺结合形成红色化合物N-α-萘胺偶氮苯磺酸。

硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝酸，可用硝酸试剂检验。沙门氏菌属、假单胞菌属的某些菌株还可以继续分解亚硝酸，出现假阳性结果。不出现红色时加人少许锌粉，若出现红色表明产生了芳基腆，硝酸盐未被还原；若无红色产生，表明已被还原为氨和氮。有时通过加小倒管，观察产氮气情况，如铜绿假单胞菌、粪产碱菌。

(2)培养基  硝酸盐培养基。

(3)试剂  甲液；乙液。

(4）试验方法  被检菌接种于硝酸盐培养基中，于36℃培养24h,将甲、乙液等量混合后（约0.1mL）加人培养基内，立即观察结果。

(5)结果  加人试剂15min内出现红色为阳性反应（＋）。若加入试剂后无颜色反应，可能是：①硝酸盐没有被还原，试验阴性；②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果。这时应在试管内加人少许锌粉，放置10min，如出现红色则表明试验确实为阴性（-）。若仍不产生红色，表示试验为假阴性（＋）。若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加1个小倒管，如有气泡产生，表示有氮气生成。用α-萘胺进行试验时，阳性红色消退很快，故加人后应立即判定结果。进行试验时必须有未接种的培养基管作为阴性对照。a-蔡胺具有致癌性，故使用时应加以注意。

(6)应用  本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有此厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。