(1)原理  某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸等）或含硫化合物产生硫化氢．硫化氢遇铅盐或亚铁离子则形成黑褐色的硫化铅或硫化亚铁沉淀。

以半胱氨酸为例，其化学反应过程如下

CH2SHCHNH2COOOH+H2O→CH3COCOOH＋H2S↑＋NH3↑

H2S+Pb(CH3COO)2→PbS↓＋2CH3COOH

(2)试验方法  常用方法有三种。

①在含有硫代硫酸钠等指示剂的培养基中，沿管壁穿刺接种，于（36±1)℃培养24-28h，观察培养基颜色。阴性应继续培养至第6天。

②醋酸铅纸条法：将待试菌接种于一般营养肉汤，再将肉汤培养物接种于加有0.02%盐酸半胱氨酸的基础培养基中，将一根浸有饱和醋酸铅的滤纸条悬于试管的上部（不让滤纸条接触培养基），用管塞压住或旋紧试管帽。置37℃培养。每日检查，观察滤纸条是否变黑。对未出现阳性反应者需培养5d，方可做出最后判断。

③将被检菌穿刺接种于醋酸铅培养基或克氏铁琼脂等培养基，于（36士1)℃培养24-48h，观察结果。

(3)结果  纸条或培养基变黑色为阳性（＋），不变为阴性（一）。

(4)应用  硫化氢试验可以用来检测硫化氢的产生情况，是用于肠道细菌检查的常用生化试验，主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。如沙门氏菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸椽酸杆菌属、变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性，其他菌属阴性。沙门氏菌属中也有硫化氢阴性菌种。此外，腐败假单胞菌、口腔类杆菌和某些布鲁氏菌硫化氢也阳性。如大肠埃希氏菌为阴性，产气肠杆菌为阳性。