(1）原理不同细菌具有不同的酶，对糖类的分解能力和代谢产物也不同，借此可以鉴别细菌。有的能分解多种糖类，有的仅能分解1-2种，还有的不能分解糖类。细菌分解糖类后的终产物也不相同，有的产酸产气，有的仅产酸不产气。例如：大肠埃希氏菌能使乳糖发酵，产酸产气，而伤寒杆菌则不能利用乳糖；大肠埃希氏菌能使葡萄糖发酵，产酸产气，而伤寒杆菌则只产酸、不产气。普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，但不能分解乳糖。

不同的细菌可根据分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据，可用指示剂及发酵管检验。

对于各种醇和昔的利用生化试验同糖发酵试验原理和操作相似。

(2）培养基发酵培养基含有蛋白脏、指示剂和不同的糖类。一般常用的指示剂为酚红、嗅甲酚紫、澳百里蓝等，若使用嗅甲酚紫，则其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色。通常在培养基中加人0.500^1％的糖类（单糖、双糖或多糖）。常用糖类有葡萄糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖、蜜二糖、蔗糖、木糖、阿拉伯糖。其中麦芽糖、木糖和阿拉伯糖需过滤除菌，临用时加人。因培养基中Eh值的不同，产物可能也不同。厌氧菌培养基须加人0.1％的硫乙醇酸钠。培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。

(3)试验方法以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管；若为半固体培养基，则用接种针做穿刺接种。接种后，置（(36±1)℃培养数小时至2周后（一般2-3d)，观察结果。若用微量发酵管或要求培养时间较长时，应保持湿度，以免培养基干燥。

(4）结果接种的细菌，若能分解培养基中的糖产酸时，培养基中的指示剂呈酸性反应（澳甲酚紫指示剂变黄）。若产气可使液体培养基中倒管内或半固体培养基内出现气泡，固体培养基内有裂隙等现象。若不分解该糖，培养基中除有细菌生长外，无任何其他变化。

(5)应用糖发酵试验是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。乳糖发酵试验能初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌，肠道致病菌多数不发酵乳糖，肠道非致病菌多数发酵乳糖。