用接种针在含0.35％-0.6％的琼脂或更低含量琼脂的半固体培养基上垂直穿刺培养，插到离小试管底部只有5mm左右时再垂直抽回来，即做一条穿刺线。放培养箱中适温培养18-24h可观察结果。

如果只沿穿刺线生长，穿刺线清晰，未扩散，则表明动力阴性。如果穿刺线模糊，侧光看可明显观察到穿刺线周围有扩散生长的痕迹，则为阳性。不同菌有不同形状，如李斯特氏菌为倒伞形状。