一、实训目标

1．掌握GC内标法测定药物含量的方法与计算；

2．熟悉气相色谱仪的工作原理和操作方法。

二、实训原理

气相色谱法是在一定温度下，流动相（载气）携带样品通过固定相时，样品中各成分在两相中分配系数不同，经多次分配后各成分彼此分离，用检测器鉴定各成分并测定含量。

内标法是将一定质量的纯物质（非被测组分的纯物质）作为内标物，加人到准确称取的试样中，根据被测物质和内标物的质量及其在色谱图上相应峰面积之比，求出被测组分的质量分数。

本实训是以正三十二烷作为内标物。

三、实训仪器与试剂

1．仪器

气相色谱仪GC-14B;OV-17大口径毛细管色谱柱；棕色容量瓶（l0mL)；移液管（l0mL)。

2．试剂

维生素E对照品；维生素E胶丸；正三十二烷；正己烷。

四、实训步骤

本品含维生素E(C31H52O3）应为标示量的90.0%-110.0%。维生素E在无水乙醇、丙酮、乙醚或石油醚中易溶，在水中不溶。

1．色谱条件与系统适用性实验

2．校正因子测定

取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1mL中含1.0mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞瓶中，精密加入内标溶液l0mL，密塞，振摇使溶解，取1-3μL注入气相色谱仪，计算相对校正因子。

f’i=mi/Ai/ms/As

式中As——内标物的峰面积；

Ai——对照品的峰面积；

ms——加入内标物的质量；

mi——加入对照品的质量。

3．样品测定

取样品20粒，精密称定，倾出内容物，混合均匀。囊壳用乙醚洗净，置通风处使溶剂自然挥尽，再精密称定囊壳质量，求得平均每粒装量。精密称取内容物适量（约相当于维生素E20mg),置棕色具塞瓶中，精密加入内标溶液l0mL，密塞，振摇使溶解，取1-3μL注入气相色谱仪，计算含量。

wi＝ms/m样×f’i×Ai/As

式中ms——加入内标物的质量；

m样——加入对照品的质量；

As——内标物的峰面积；

Ai——待测物的峰面积；

f’i——待测物的相对校正因子。

维生素E为（±）-2,5,7,8-三甲基-2-(4',8',12’一三甲基十三烷基）-6-苯并二氢吡喃醇酯酸酯。本品含维生素E(C31H52O3）应为标示量的90.0%-110.0%。

五、注意事项

(1)注射器使用前应先用丙酮或乙醚抽洗5-6次，然后再用所要吸取的试液抽洗5-6次。

(2)氢气是一种危险气体，实验过程中一定要按要求操作，而且色谱实验室要有良好的通风设备。