一、实训目标

1．掌握用分光光度法测定中药制剂中总生物碱含量；

2．掌握紫外分光光度计的使用方法。

二、实训原理

用超声震荡提取法，将生物碱以盐的形式提取后，用氧化铝作净化剂进行液一固萃取净化处理，使提取液中极性大的干扰组分保留于柱上，小梁碱型生物碱被洗脱，以消除干扰。

盐酸小檗碱在345nm±1nm处有最大吸收波长，在此波长处测定洗脱液的吸光度，以吸光系数法按盐酸小檗碱（C20H18CINO4）的吸光系数（E1%1cm）为728计算总生物碱的含量。

三、实训仪器与试剂

1．仪器

内径9mm层析柱；分光光度计；分析天平；锥形瓶。

2．试剂中性氧化铝；盐酸；甲醇；乙醇；黄连药材（市售品）。

四、实训步骤

1．提取

取本品粉末（通过三号筛）约0.8g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入盐酸一甲醇(1：100)溶液50mL，密封。将此锥形瓶置于超声振荡器中超声提取30min，过滤，得滤液。

2．净化

精密量取上述溶液5mL加于已处理好的氧化铝柱上（玻璃柱内径9mm，中性氧化铝7g,湿法装柱用乙醇约30mL预洗），用乙醇约25mL分次洗脱，收集洗脱液，置于50mL-容量瓶中，用乙醇稀释至刻度（留下次实验用），取上述溶液1mL至25mL容量瓶中，加硫酸（0.05mo1/L)稀释至刻度，摇匀。

3.测定方法

照分光光度法，在345nm的波长处测定吸光度，按盐酸小檗碱（C20H17NO4•HCl）的吸光系数（E1%1cm）为728计算即得。本品按干燥品计，含盐酸小檗碱（C20H17NO4•HCl）不得少于7.0%。

五、注意事项

(1)使用挥发性溶液时应加盖，为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用蘸有空白溶剂的擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。

(2)采用吸光系数法应对仪器进行校正后测定。