不论是精氨酸的转甲基酶，还是赖氨酸的SET结构域依赖的转甲基酶，都在一定程度上具有底物特异性。不同的PRMTs可以甲基化RNA结合蛋白、髓磷脂基质蛋白（MBP )、组蛋白和生长因子等。赖氨酸甲基化蛋白包括组蛋白和延长因子1A。体内甲基化实验用来确定一个新发现的转甲基酶是否具有GST融合蛋白活性，并且确定转甲基酶的特异性。用于体外甲基化反应的底物蛋白可以是重组蛋白（按3.1中纯化）或酸提取法纯化的组蛋白。为了得到最好的结果，应该始终用新鲜制备的酶。

(1）取一个1. 5m1的EP管，加入1. 0μg底物、1. 0μg重组的酶、1.0μL-［甲基-3H］甲硫氨酸、3.0μl 10×PBS，加水至30μl并混匀。

(2) 混匀后，离心3s。

(3) 30℃孵育样品l h。

(4）加6 μ1 6 ×SDS蛋白上样缓冲液停止反应，95℃加热5 min。

(5）取15μl反应物在10％的SDS - PAGE，用Tris-甘氨酸缓冲液100V电泳lh。

(6）把分离好的样品，用半干转印法将蛋白转印到PVDF膜上。

(7）固定有蛋白的膜，喷EN3HANCE 3次，每次操作间隔10 min。

(8）将PVDF膜晾30min至完全晾干，放置在X胶片上过夜。