北京普天同创生物科技有限公司
(1) pGEX6P-1细菌表达载体(Amersham Biosciences, Piscat-away,NJ)。
(2)谷胱甘肽琼脂糖4B(Amersham Biosciences)、谷胱甘肽。
(3)埃希氏菌属的大肠杆菌的BL21。
(4)培养基:l0g胰蛋白陈,5g酵母粉,l0g NaCl。
(5)琼脂培养基:l0g蛋白膝,5g酵母粉,log NaCl, 15g琼脂粉。
(6) IPTG(isopropyl-b-D-thio-galactopyranoside)。
(7)PBS: 137mmol/L NaCl,2.7mmol/L KCl, 4.3mmo1/L Na2HPO4,1. 4 mmol/L KH2PO4,pH 7.4。
(8)丙烯酰胺、脱脂奶粉、Tween-20、冰醋酸、甲醇、氨苄青霉素。
(9) S-腺苷-L-[甲基-3H]甲硫氨酸或[3 H ] AdoMet:约70-85 Ci/mmol,用12. 6 μmol/L储液稀释,稀盐酸/甲醇9:1,pH 2. 0-2.5(Amersham Biosciences )。
(10) EN3 HANCE粉末(PerkinElmer Life Sciences,Boston,MA)。
(11)蛋白A/G (Pierce, Rockford, IL)。
(12)洗脱液:100mmo1/L Tris·HCl, pH 8.0; 120mmol/L NaCl;30 mmol/L还原型谷胱甘肽。
(13) Tris-甘氨酸电泳液:25mmol/L Tris - base, 0. 2mo1/L甘氨酸,0. 1 % SDS。
(14)转膜缓冲液:25mmol/L Tris-base, 0.2mol/L甘氨酸,0. 1 % SDS, 20%甲醇。
(15)染色液:0. 5g考马斯亮蓝,200ml甲醇(100%)。
(16)组蛋白。
(17) 6×SDS上样缓冲液:180mmol/L Tris·HCl, pH 6. 8, 30%甘氨酸,10% SDS, 0. 6 mol/L DTT, 0. 012%溴酚蓝。
(18)PVDF膜(polyvinylidene difluoride)(Milipore,Bedford,MA)。
(19)细胞培养液A ; DMEM, 10%胎牛血清,cycloheximide(100μg/ml ),chloroamphenicol (40μg/ml )。
(20)细胞培养液B:不含甲硫氨酸的DMEM (DMEM/-Met) ,10%胎牛血清,cycloheximide (100Rg/ml), chloroamphenicol (40wg/ml)。
(21) L-[甲基-3H]甲硫氨酸:约70-85 Ci/mmol (AmershamBiosciences)。
(22) 温和裂解液:10mmol/L Tris·HCl, pH 7.5, 1 % (V/V )Triton X-100, 150mmol/L NaCl, 5mmol/L EDTA,蛋白酶抑制剂混合物(Roche,Indianapolis,IN)。
(23)腺苷-2, 3-二醛(AdOx) (Sigma)。
(24)带有锥形头的超声机(model 500) (Fisher Scientific, Pitts-burgh,PA)。
(25)电泳仪(Bio-Rad,Hercules,CA)。
(26)半干转印仪(Amersham Biosciences )。
(27)柯达胶片(Eastman Kodak,Rochester, NY)。
(28)抗体。
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