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传代方法 | 1.贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液,然后10000rpm(11200g)离心1min,倒尽上清,加200μL缓冲液GA,振荡至彻底悬浮; 2.加入20μL Proteinase K溶液,混匀; 3.加入200μL缓冲液GB,充分颠倒混匀,70℃放置10min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠; 4.加人200μL无水乙醇,充分振荡混匀15sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠; 5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(13400g)离心30sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中; 6.向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(13,400g)离心30sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中; 7.向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(13400g)离心30sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中; 8.重复操作步骤7; 9.将吸附柱CB3放回收集管中,12000rpm(13,400g)离心2min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液; 10.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μL洗脱缓冲液TE,室温放置2-5min,12000rpm(13400g)离心2min,将溶液收集到离心管中; |
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