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副流感嗜血杆菌基因组DNA-普天同创

副流感嗜血杆菌基因组DNA

Genomic DNA from Haemophilus parainfluenzae
  • 价格: ¥1800
  • 编号:BNCC362563
  • 形式:冻干粉;5μg/支
  • 交付:当天
  • 品牌:BNCC
基本信息 相关资源
副流感嗜血杆菌基因组DNA基本信息
传代方法 使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签; 1.取细菌培养液1-5ml,10,000rpm(11,500×g)离心1min,尽量吸净上清; 2.向菌体沉淀中加入200μL缓冲液GA,振荡至菌体彻底悬浮。注意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可略过第2步骤,加入溶菌酶溶液进行破壁处理,具体方法为:加入110μL缓冲液(20mM Tris,pH8.0;2mM Na2-EDTA;1.2%Triton),和70μL溶菌酶溶液(50mg/mL,客户自备,目录号:RT401),37℃处理30min以上。如果需要去除RNA,可加入4μL RNase A(100mg/mL)溶液(客户自备,目录号:RT405-12),振荡15sec,室温放置5min; 3.向管中加入20μL Proteinase K溶液,混匀; 4.加入220μL缓冲液GB,振荡15sec,70℃放置10min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯; 5.加220μL无水乙醇,充分振荡混匀15sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠; 6.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm(13,400×g)离心30sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中; 7.向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm(13,400×g)离心30sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中; 8.向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm(13,400×g)离心30sec,倒掉废液,吸附柱CB3放入收集管中; 9.重复操作步骤8; 10.将吸附柱CB3放回收集管中,12,000rpm(13,400×g)离心2min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验; 11.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μL洗脱缓冲液TE,室温放置2-5min,12,000rpm(13,400×g)离心2min,将溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于50μL,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室温放置2min,12,000rpm(13,400×g)离心2min;
存储条件 2-8℃
安全等级 0
共享方式 公益性共享
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