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培养基 | 酵母膏:5.0,蛋白胨:10.0,NaCl:10.0,琼脂:15.0,pH:7.0±0.1(25℃) |
传代方法 | 1.Stbl3感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。 2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3.向离心管中加入0.9 mL 室温S.O.C. 培养基或LB培养基(推荐使用SOC培养基,可提高转化效率)。 4.30℃,225 rpm复苏90分钟。(当质粒中含有不稳定片段时, 30℃培养可降低错误重组的概率,若转化controlPUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟。) 5.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 培养基上。 6.将平板倒置放于30℃培养箱过夜培养。(若转化controlPUC19 计算转化效率,则需37℃培养过夜) |
生长条件 | 37℃;18-24h;好氧 |
存储条件 | -80℃ |
安全等级 | 1 |
共享方式 | 公益性共享 |
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