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培养基 | 500mlECM+25mlFBS+5mlECGS+5mlP/S |
传代方法 | 复苏步骤:①冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中,迅速没入37℃水浴锅,摇晃冻存管加速溶解,以1min内全部溶解为宜;②在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9mL完全培养基的离心管内,1000-1200rpm离心5min,弃去上清液,用1-2mL完全培养基重悬细胞。③将细胞悬液加入到含有5-6mL完全培养基的T25瓶中,放入培养箱培养。 细胞传代:1.将瓶内培养基弃掉,加入PBS润洗两遍2.加入2.5mL胰酶(T/E溶液)轻轻摇晃烧瓶,以确保用T/E溶液完全覆盖细胞。用显微镜监测细胞形态的变化3.一旦细胞开始变圆,将 T/E 溶液从烧瓶转移到 15 ml 离心机中管(一小部分细胞可能会分离)并继续在 37℃ 下孵育培养瓶1分钟(此时烧瓶中没有溶液)4.在孵育结束时,轻轻拍打烧瓶的一侧,将细胞从表面移出。在显微镜下检查,确保所有的细胞都脱落。5.在烧瓶中加入5 ml TNS溶液,将分离的细胞转移到15 ml离心管中。再用5 ml的TNS冲洗烧瓶,收集残留的细胞。6.在显微镜下观察烧瓶是否成功收获细胞,观察留下的细胞数量;应该少于5%。7.将15 ml离心管以1000 rpm离心5分钟。在培养基中轻轻地重悬细胞。8.注意培养基pH值变化和细胞密度,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%-90%时,重复传代操作或者冻存。 |
生长条件 | 37℃;5%CO2+95%空气; |
生长特性 | 贴壁生长 |
存储条件 | 液氮 |
安全等级 | 0 |
形态 | 内皮细胞,梭形,单层贴壁生长 |
共享方式 | 公益性共享 |
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