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培养基 | 90%DMEM-H+10%FBS |
传代方法 | 复苏步骤:①冻存管从液氮或-80℃中取出放入 PE 手套中,迅速没入 37℃水浴锅,摇晃冻存管加速溶解,以 1 分钟内全部 溶解为宜;②在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有 9ml 完全培养基的离心管内,1000-1200rpm/min 离心 5 分钟,弃去 上清液,用 1-2mL 完全培养基重悬细胞。③然后将细胞悬液加入到含有 5-6mL 完全培养基的 T25 瓶中,放入培养箱培养。 细胞传代:①将旧培养液吸除,PBS 清洗两遍后,加入 1-2mL 胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);②镜下观察消化情况, 在细胞边缘缩小,贴壁松动时(可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处,肉眼可见细胞层脱落,即消化完成,否则继续 消化),直接吸掉胰酶,加入 5-6 毫升完全培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散。③将细胞悬液按 1:2 比例分到 新的 T25 瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。④注意培养基 pH 值变化和细胞密度,定期换 液(每周 2-3 次),待细胞密度达到 80%-90%时,重复传代操作或者冻存。 |
生长条件 | 培养温度37℃;气体环境5%CO2+95%空气; |
生长特性 | 半贴半悬生长 |
存储条件 | 液氮 |
安全等级 | 1 |
形态 | 上皮细胞样,圆形 |
分离基物 | 外周血淋巴细胞 |
共享方式 | 公益性共享 |
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