转基因大豆 MON89788 质粒分子标准物质
Plasmid DNA Containing Containing Genetically Modified MON89788 Soybean DNA Fragments
转基因大豆 MON89788 质粒分子标准物质可用于转基因大豆、食品和饲料等的定量检测、安全评价、实验室质量控制、方法评价与验证、技术仲裁等。
一、样品制备
本标准物质是将转基因大豆 MON89788 转化体特异性序列和内标准基因片段共同构建于 pEASY-T3 载体,得到 pNIM-004 质粒分子,经提取,纯化和质量检测及均匀性初检合格后稀释至 4.02×106copy/μL 进行分装。
二、溯源性及定值方法
该标准物质采用测序法、数字 PCR 方法对转基因大豆 MON89788 转化体特异性基因片段和大豆 内标准基因片断的拷贝数比值进行定值测量。测序法测量结果作为标准物质测序比值标准值;数字 PCR 方法测量结果作为标准物质 PCR 比值标准值。本标准物质通过使用满足计量学特性要求的制备 方法、测量方法和计量器具,保证其量值溯源性。
三、特性量值及不确定度
编 号
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标准值及不确定度
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GBW10092
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测序比值
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扩展不确定度(%)
(k=2)
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PCR 比值
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扩展不确定度(%)
(k=2)
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1.00
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0.04
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1.01
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0.09
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标准值不确定度评定考虑了定值方法、均匀性、稳定性引入的不确定度分量。
四、均匀性和稳定性考察
按照 JJF1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》,采用采实时荧光定量 PCR 方法对 该标准物质进行均匀性检验研究,最小取样量 5μL,结果表明均匀性良好。按照先密后疏的原则采用实时荧光定量 PCR 方法对该标准物质进行稳定性考察研究,标准值无方向性变化并通过平均值一 致性检验,表明稳定性良好。
本标准物质自定值日期起,有效期为 6 年。
五、包装、储存及使用
1.包装与储存:本标准物质采用 2mL 立式拧口塑料离心管包装,500μL/瓶。建议-70℃ 低温长期保存。
2.使用注意事项:使用前应先从冰箱内取出,平衡至室温后再打开瓶盖使用。样品开封后,应尽快恢复密封状态。
3.使用建议:使用本标准物质制作标准曲线时,按照表 1 进行梯度稀释,然后再采用荧光定量 PCR 进行检测,引物和探针序列详见表 2。
表 1 转基因大豆 MON89788 质粒分子标准物质梯度稀释说明
初始浓(copy/μL)
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终浓度(copy/μL)
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质粒 DNA(μL)
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TE(μL)
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4.02×106
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4.02×105
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20
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180
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4.02×105
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4.02×104
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20
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180
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4.02×104
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4.02×103
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20
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180
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4.02×103
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4.02×102
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20
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180
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4.02×102
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4.02×101
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20
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180
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表 2 外源基因和内标准基因的引物及探针序列
基因名称
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引物或探针
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序列信息 (5’-3’)
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扩增片段长度
/(碱基)
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外源基因
MON89788
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上游引物
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TCCCGCTCTAGCGCTTCAAT
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139
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下游引物
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TCGAGCAGGACCTGCAGAA
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探针
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FAM-CTGAAGGCGGGAAACGACAATCTG-TAMRA
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内标准基因 Lec
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上游引物
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CCAGCTTCGCCGCTTCCTTC
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74
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下游引物
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GAAGGCAAGCCCATCTGCAAGCC
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探针
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FAM-CTTCACCTTCTATGCCCCTGACAC-TAMRA
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声明
1.本标准物质仅供实验室研究与分析测试工作使用。因用户使用或储存不当所引起的投诉,不予承担责任。
2.收到后请立即核对品种、数量和包装,相关赔偿只限于标准物质本身,不涉及其他任何损失。
注:证书信息仅供参考,以产品附带证书为准。