转基因水稻 BT63(TT51-1)质粒分子
Plasmid DNA Containing Genetically Modified BT63 (TT51-1) Rice DNA Fragments
转基因水稻 BT63 (TT51-1)质粒分子标准物质的研制可用于转基因水稻、食品和饲料等的定量检测、 安全评价和实验室质量控制等领域。
一、样品制备
本标准物质是将转基因 BT63(TT51-1)水稻转化体特异性序列和内标准基因片段共同构建于 pEASY-T3 载体,得到 pBT63 质粒分子,经提取,纯化和质量检测及均匀性初检合格后稀释至 8.9×105 拷贝/μL 进行分装。
二、溯源性及定值方法
该标准物质采用测序法对转基因水稻 BT63(TT51-1)转化体特异性基因和水稻内标准基因片断的拷 贝数进行测定,作为认定值。采用数码 PCR 方法对转基因水稻 BT63(TT51-1)转化体特异性基因和水 稻内标准基因片断的拷贝数进行测定,作为标准物质的测量值。本系列标准物质通过使用满足计量学特 性要求的制备方法、测量方法和计量器具,保证其量值溯源性。
三、特性量值及不确定度
BT63 转化体特异性基因片段和内标准基因(RBE4)片段拷贝数比值
编号
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测序比值
(拷贝数比值)
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扩展不确定度
(%)(k=2)
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PCR 比值
(BT63 转化体特异性基因/内标准基因/ 拷贝数)
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扩展不确定度
(%)(k=2)
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BW4014
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1.00
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0.07
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1.00
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0.11
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标准值不确定度评定考虑了定值方法、均匀性、稳定性引入的不确定度分量。
四、均匀性和稳定性考察
按照 JJF1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》,采用采实时荧光定量 PCR 方法对该标 准物质进行均匀性检验研究,最小取样量 5μL,结果表明均匀性良好。按照先密后疏的原则采用实时荧 光定量 PCR 方法对该标准物质进行稳定性考察研究,标准值无方向性变化并通过平均值一致性检验,表 明稳定性良好。
本标准物质自定值日期起,有效期为 1 年,研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性,有效期 内如发现量值变化,将及时通知用户。
五、包装、储存及使用
1.包装与储存:本标准物质采用 2mL 立式拧口塑料离心管包装,500μL/瓶。建议-70?C 低温长期保存。
2.使用注意事项:使用前应先从冰箱内取出,平衡至室温后再打开瓶盖使用。样品开封后,应尽快恢 复密封状态。
3.使用建议:使用本标准物质制作标准曲线时,按照表 1 进行梯度稀释,然后再采用荧光定量 PCR 进行检测,引物和探针序列[1, 2]详见表 2。
表 1 转基因水稻 BT63 质粒分子标准物质梯度稀释说明
初始浓度(copy/μL)
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终浓度(copy/μL)
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质粒 DNA(μL)
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TE(μL)
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8.9×105
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8.9×104
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20
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180
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8.9×104
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2.2×104
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50
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150
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2.2×104
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2.2×103
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20
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180
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2.2×103
|
2.2×102
|
20
|
180
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2.2×102
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2.2×101
|
20
|
180
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表 2 外源基因和内标准基因的引物及探针序列
基因名称
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引物或探针
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序列信息 (5’-3’)
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扩增片段长度
/(碱基)
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外源基因
BT
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上游引物
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AGAGACTGGTGATTTCAGCGGG
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120
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下游引物
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GCGTCCAGAAGGAAAAGGAATA
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探针
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FAM-ATCTGCCCCAGCACTCGTCCG-BHQ1
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内标准基因
RBE4
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上游引物
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GTTTTAGTTGGGTGAAAGCGGTT
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106
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下游引物
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CCTGTTAGTTCTTCCAATGCCCTTA
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探针
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FAM-AGTATCTATTCCCAACCAGA-MGBNFQ
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声明
1.本标准物质仅供实验室研究与分析测试工作使用,不能作为国家有证标准物质,开展法制计量相关工作。
2.因用户使用或储存不当所引起的投诉,不予承担责任。
3.收到后请立即核对品种、数量和包装,相关赔偿只限于标准物质本身,不涉及其他任何损失。
4.仅对加盖“中国计量科学研究院标准物质专用章”的完整证书负责。请妥善保管此证书。
5.如需获得更多与应用有关的信息,请与技术咨询部门联系。
注:证书信息仅供参考,以产品附带证书为准。