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一、实验目的
1.了解氨基酸的某些化学性质。
2.了解蛋白质的某些化学性质。
二、仪器和试剂
仪器:试管、试管架、角匙、玻璃棒、漏斗、带铁圈的铁架台、圆形滤纸。
试剂:鸡蛋白溶液、干酪素(固)、酚酞试剂、甲基橙试剂、100醋酸溶液、米隆试剂、硫酸铵(固)、浓盐酸、浓硝酸、0.1mol·L-1盐酸溶液、0.1mol·L-1氢氧化钠溶液,10%硝酸银溶液、1%氯化汞溶液、10%鞣酸溶液、饱和苦味酸溶液、0.2%水合茚三酮溶液、10%a-氨基酸溶液、1%白明胶溶液、亚硝酸钠(固体)、10%氢氧化钠、1%硫酸铜。
三、实验内容
1.α-氨基酸的性质
(1)与亚硝酸钠的作用
取1支试管加入α-氨基酸溶液10滴,加入1滴0.1mol·L-1 HCl,再加固体亚硝酸钠半角匙,观察有无气泡产生?
(2)与水合茚三酮的反应
取1支试管加入α-氨基酸10滴,然后加入0.2%水合茚三酮2或3滴,加热,观察溶液的颜色变化。这个反应可用于α-氨基酸的定性鉴定。
2.蛋白质的性质
(1)两性性质取2支试管,各加3mL蒸馏水。在一支试管中加1滴0.1mol·L-1 HCl和1滴甲基橙指示剂,观察溶液颜色的变化,另一支试管中加1滴0.1mol·L-1 NaOH和1滴酚酞指示剂,观察溶液颜色的变化。然后在这2支试管中加入干酪素1-2小角匙,摇动2~3min,观察颜色的变化,并加以解释。
(2)盐析作用取1支试管,加入5mL鸡蛋白溶液,再加少量固体(NH4)2SO4,摇动试管,直到(NH4)2SO4溶解,静止10min,观察球蛋白沉淀析出。过滤,然后在滤液中逐渐加固体硫酸铁,边加边摇动试管,直至饱和,此时,清蛋白沉淀析出。
另取1支试管加10滴混浊的清蛋白溶液,再加2-3mL蒸馏水,摇动均匀,观察清蛋白沉淀是否溶解。
3.变性作用
(1)无机酸的作用
取2支试管,分别加入1mL浓盐酸和浓硝酸,然后将2支试管倾斜,沿着管壁小心地滴加鸡蛋白溶液各10滴。注意观察在蛋白质与酸交界面上是否出现蛋白质沉淀所形成的白色环。
(2)重金属盐的作用
取2支试管,各加10滴鸡蛋白溶液,然后分别加入数滴硝酸银和氯化汞溶液,至蛋白质沉淀完全。往试管里各加2mL水,观察沉淀是否溶解。
某些金属离子,如Cu2+、Hg2+、Pb2+、Ag+等,都能与蛋白质发生变性沉淀,所以重金属盐是有毒的。
(3)与生物碱试剂的作用取2支试管,各加1mL鸡蛋白溶液和2滴1%HAc,再分别滴加5~10滴饱和苦味酸和10%鞣酸,观察沉淀的生成。再分别加H2O,是否溶解?
(4)受热沉淀在1支试管中加2mL鸡蛋白溶液,放入沸水洛中加热5-10min,观察现象。再加2-3mL H2O,观察絮状沉淀是否溶解?
4.颜色反应
(1)二缩脲反应取1支试管,加入5滴鸡蛋白溶液,然后依次加入10%氢氧化钠溶液10滴和1%硫酸铜溶液2滴,摇匀观察玫瑰紫色的出现。
蛋白质在碱性溶液中加入硫酸铜稀溶液,会显示从浅红色到紫蓝色,这个反应称二缩脲反应。二缩脲反应显示蛋白质分子中钛键。从三钛到一切蛋白质都有此反应。呈色是由于生成铜的配合物。
(2)黄蛋白反应取1支试管,加入10滴鸡蛋白溶液,再加浓硝酸2滴,小心加热2-3min,沉淀即变成黄色。冷却后加10%氢氧化钠10滴左右,使之成为碱性,黄色变成橙色。
蛋白质分子中含有苯环的氨基酸,都具有此反应。
(3)米隆反应取2支试管,分别加入鸡蛋白溶液和白明胶各5滴,然后在试管中各加入2滴米隆试剂,观察颜色的变化,加热后,再观察颜色的变化。蛋白质分子中含有酚结构的氨基酸都有此反应。
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