接种时由于有一个敞口的过程，所以是极易引起污染的时期，这一时期主要由空气中的细菌和工作人员本身引起，接种室要进行严格的空间消毒。，通过灭菌的操作空间和使用的器皿以及衣服和手都不带有任何活着的微生物，在这样的条件下进行的操作，叫无菌操作。外植体的接种是把经过表面灭菌后的植物材料切碎或分离出器官、组织或细胞，再接种到无菌培养基上的全部操作过程。整个接种过程均需无菌操作，具体操作程序如下。

(1)空间消毒，接种室内保持定期1％～3％的高锰酸钾溶液对设备、墙壁、地板等进行擦洗；除了使用紫外线和甲醛消毒外，还可在工作期间用75％的酒精或3％的来苏儿喷雾，使得宰气中灰尘颗粒沉降下来。在接种4 h前，需用甲醛熏蒸接种室，并打开紫外灯进行灭菌。

(2)在接种室放好接种所需要的酒精灯，储存有75％、95％酒精和广口瓶或专用灭菌器，各种镊子、接种针、解剖刀、手术剪、火柴、培养基等。工作台面上的用品要放置有序、布局合理。酒精灯在当中，右手使用的物品在右侧，左手用品在左侧。工作忌忙乱而要有序；组织、细胞及培养板在末做处理和使用前，不要过早暴露于空气中，应分别使用不同吸管吸取营养液、细晌悬淆及奠他各种用液，不能混用。

(3)接种前20 min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯杀菌。

(4)操作人员需穿上已灭菌的白色工作服，并戴上口罩，上超净工作台前操作员的双手必须进行灭菌，用肥皂水洗涤能达到良好的效果，进行操作前再用75％的酒精棉球擦洗双手和前臂，特别是指甲处，然后擦拭工作台表面，在操作期问还要经常用75％的酒精棉球擦拭双手和台面及相关用具，避免交叉污染。

(5)在超净工作台上将接种的植物材料置于一个有盖的玻璃瓶中，注入适当的消毒液，使材料完全浸没在消毒液中并计时，盖上瓶盖，在消毒期间需把材料消毒瓶摇动2～3次。

(6)消毒处理后，将瓶盖打开，将消毒液倒出，注入适量的无菌水，再盖好盖，摇动数次，将水倒掉，如此重复3～4次。

(7)在对植物材料进行消毒处理的同时，可对工作台面、器械等进行消毒。方法是用酒精棉球擦拭台面，将镊子等工具蘸入95％的酒精中，然后取出再置酒精灯火焰上从头至尾灼烧一遍。尤其是与外植体接触的尖端处要反复过火，但要注意，金属器械不能在火焰中长时间烧灼，以防退火。烧灼过的器械要冷却后才能使用。一般在不使用时，应将刀、剪、镊子等用具浸泡在95％酒精中，用时在火焰上灭茼或放入专用灭菌器，待冷却后使用，用具每次使用前均需灭菌。

(8)在打开三角瓶或试管前，先用酒精灯火焰烧瓶口，可防止管口边沿沾染的微生物落入管内，当打开瓶子或试管时，应拿成斜角，以免灰尘落入瓶中，如果培养液接触了瓶口，则要将瓶口烧到足够的热度，以杀死存在的细菌。

(9)将材料取出，置于一个已灭过菌的培养皿中。切取适当的外植体，将其接种到瓶内的培养基上，材料接种好以后，应将瓶口在酒精灯火焰上转动烧一遍，然后迅速封口，注明材料名称及接种日期。为避免灰尘污染瓶口从而感染瓶内的培养基，可用已灭菌的报纸包扎瓶口和塞子，以遮盖瓶子颈部和试管口部。

(10)接种时双手不能离开工作台。操作员的呼吸也是污染的主要途径，通常咳嗽会增加细菌感染的概率。因此，在操作过程中间应禁止讲话，也不能走动、咳嗽等。

(11)接种完毕要及时清理台面并及时灭菌，可用紫外灯照射30 min。若连续接种，每天要大强度灭菌一次。