(8)联用技术

由于世界各国对CAPs在动物源食品中残留限量的要求逐渐严格，并需要提供化合物的确证信息，使得各国研究人员不断优化残留检测各个环节，力求最大限度地提高检测灵敏度和准确度。近年来快速发展的色谱-质谱等联用技术集分离、结构鉴定和定量检测于一体， 因为具有高灵敏度并能提供结构信息而成为残留分析的研究热点。目前，用于CAPs残留分析的主要有气相色谱质谱法( gas chromatography-mass spectrometry， GC-MS) 和液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry， LC-MS) 等。

1)气相色谱-质谱法(GC-MS)

CAPs经硅烷化衍生后，在质谱电离源进行电离，都会产生几个丰度较大的碎片离子，便于进行定性鉴别，且灵敏度高，可以达到ng级。当采用选择离子模式(SIM)监测时，灵敏度可达到pg级以下。CAPs的GC-MS分析可以采用电子轰击源(EI)和负离子化学源(NCI)两种电离方式，不同离子源对同一药物的离子碎裂过程产生不同的影响，可结合药物化学结构选择合适的离子源，提高检测灵敏度。目前，CAPs 大多采用NCI的模式，其TMS衍生物的质谱碎裂图见图4-2。

图4-2 CAPs 的TMS衍生物在NCI模式下的质谱碎裂图
(a) CAP： (b) FF： (e) TAP

谢孟峡等采用GC-NCIMS检测肌肉、猪肝等动物组织中CAP的残留。乙酸乙酯和磷酸盐缓冲液提取，经硅胶柱和C₁₈柱净化、富集，BSTFA 衍生化后，GC-MS检测。方法LOD为0.1 μg/kg，加标回收率在80%～ 100%之间，RSD小于20%。该方法灵敏度高，但样品处理过于复杂。路平等对GC-MS法检测鸡肉中的CAP进行了研究。乙酸乙酯提取，正己烷净化，BSTFA-TMCS衍生化，GC-NCIMS测定。SIM扫描，方法LOD为0.1 μg/kg，在0.5～50 μg/kg范围内呈线性相关，回收率为70.0%～94.0%。我国农业部于2006年发布了国家标准《动物源食品中氯霉素残留量的测定气相色谱-质谱法》(农业部781公告-1-2006) 。该标准适用于猪、鸡肝脏、肌肉中CAP残留量的检测。采用乙腈-4%氯化钠水溶液、乙酸乙酯重复提取，正己烷除去脂肪杂质，C₁₈固相萃取柱进一步 净化，氮气吹干后进行BSTFA-TMCS衍生化反应，定容后用GC-NCI/MS测定。此方法灵敏度较好，在鸡肉、鸡肝中的LOD为0.1 μg/kg，LOQ 为0.5 ug/kg；在0.5～5 μg/kg添加浓度范围内的平均回收率为60%～110%。奉夏平等报道了采用MSPD结合大体积进样GC-MS测定组织中的CAP残留。将匀浆后的组织样品用MSPD净化，经衍生化后用GC-NCIMS测定。在GC-MS上用NCI和SIM模式进行测定，提高了测定的灵敏度和抗干扰能力。采用程序升温汽化大体积进样，进样量为100μL，是常规进样量的100倍，使得方法的LOD降低了2个数量级，达到了5 pg/g。采用MSPD替代SPE，大大简化了样品前处理步骤，提高了方法的准确度和精密度。加标浓度为0.01～ 10.0 ng/g时，回收率在95.88%～ 107.69%之间，CV小于5.92%。Van Ginkel等报道了尿、蛋、肉中CAP的GC-MS检测方法。尿液调至pH 5.2，β-葡萄糖醛酸酶水解，经Extrelut 柱和C₁₈柱净化；蛋和肉用乙酸乙酯提取，氧化铝柱净化。蒸干洗脱液后，Sylon BFT衍生化，用GC-NCIMS测定，方法LOD可达到0.1 μg/kg。

李鹏等报道了CAP、TAP和FF在动物组织中多残留的GC-MS方法。样品经乙酸乙酯提取，正己烷脱脂，再用Florisil柱净化，甲苯为反应介质，用BSTFA-TMCS进行硅烷化处理，mCAP 作为内标进行GC-NCIMS测定。选择离子分别为mCAP： m/z432、 466、468和470； CAP： m/z 376、378、466和468； TAP： m/z 409、411、499和501； FF： m/z 339、341、429和431。CAP、TAP 和FF的LOD分别为0.03 μg/kg、0.2 μg/kg和0.2 μg/kg。Shen 等采用乙酸乙酯提取肌肉和肝脏中的CAP、TAP、FF和FFa，冷冻除脂后，再用正己烷LLP净化，接着过HLB柱，经BSTFA+1% TMCS衍生化后，用GC-NCIMS测定。SIM监测，方法回收率在78.5%～ 105.5%之间，RSD 小于17%； CAP 的LOD为0.1 μg/kg， TAP、FF和FFa为0.5 μg/kg。Azzouz等报道了检测动物可食组织中CAP、TAP、FF的GC-MS方法。样品经去除蛋白、脱脂，连续SPE净化后，GC-MS 测定。方法在0.4～2.7 ng/kg之间，回收率在92%～ 101%之间，日内、日间RSD小于7%。该作者还报道了检测牛奶中CAP、TAP、FF的GC-MS方法。样品经去除蛋白，连续SPE净化后，GC-MS测定。方法在0.6～ 500 ng/kg范围内呈线性，LOD在0.2～1.2 ng/kg之间。

Borner等建立了鸡蛋中CAP的气相色谱-高分辨质谱(GC-HRMS) 测定方法。样品用乙腈提取后，正己烷脱脂，硅胶SPE柱净化，Sylon HTP衍生化，GC-HRMS在NCI电离，SIM模式下检测离子m/z 466、 468、 470 和471，以mCAP和D5-CAP为内标定量。方法LOD和LOQ分别为0.3 μg/kg和0.5 μg/kg，CV 小于10%。Impens 等建立了虾中CAP的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)确证方法。样品用乙酸乙酯提取，正已烷LLP净化，再用C₁₈ SPE净化，用N-甲基-N- (三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(MSTFA)衍生后，进GC-MS/MS，采用NCI电离，分析确证。该方法可以确证0.1 μg/kg浓度水平的CAP残留。杨欣等建立虾仁中CAP的气相色谱-时间串联质谱(GC/ITMS-MS)检测方法。样品中加入CAP氘代同位素内标，用乙酸乙酯提取，正己烷脱脂肪，经C₁₈柱净化，Sylon BFT衍生后进样，采用GC/ITMS-MS，多级反应离子监测(MRM)检测。方法的LOQ为0.3ng/g；0.3ng/g、0.5ng/g和1.0ng/g加标水平的平均回收率分别为104%、111%和95%， RSD小于20%。

表4-5 综述了近十年来部分动物源食品中CAPs残留检测的GC和GC-MS分析方法。

表4-5 部分动物源食 品中CAPs残留检测的GC方法

相关链接：氯霉素类药残留测定——气相色谱法

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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