(3)薄层色谱法(thin layer chromatography，TLC)

TLC将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，根据比移值(Rf)与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值(Rf)作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。Dreassi等报道了采用平面色谱(PC)测定牛血浆中TAP含量的方法。用含有2mol/L碳酸钠的乙酸乙酯溶液提取，提取液蒸干后复溶于甲醇中。在平板上点样，色谱条件为HPTLC-NH、HPTLC-CN和HPTLC-Si 60色谱柱，流动相(展开剂)是乙酸乙酯-甲醇(5+1，v/v)和乙酸乙酯-冰醋酸(100+1，v/v)。方法平均回收率为81.5%，LOD为0.06～0.07ug/mL。

(4)流动注射-电化学检测法(flow injection-electrochemical detection， FL-ECD)

流动注射(FL)是把一定体积的试样溶液注入一个流动着的，非空气间隔的试剂溶液(或水)载流中，被注入的试样溶液流入反应盘管，形成一个区域，并与载流中的试剂混合、反应，再进入到流通检测器进行测定分析及记录。Agi等发现由于碳纤维的表面积的增加，0.0～+2.6V重复方波(SW)伏安扫描圆柱形碳纤维微电极(CFMEs)的电化学活化会显著增强CAP的阴极电流。CAP的循环伏安图表明，这是薄层电解总电流的贡献。在活化纤维上CAP的减少浓度比为6.5×10⁷ uA cm^-2 mol^-1 L。在此基础上，开发了SW伏安CFMEs检测奶中的CAP残留，并对活化中涉及的化学及电化学变量进行了优化。方法在1.0×10^-7～1.0×10^-5 mol/L呈良好线性，LOD为15ng/mL，回收率大于97%。Chuanuwatanakul 等采用循环伏安法对CAP在掺杂硼的金刚石薄膜(BDD)电极的电化学性能进行研究。当用pH60.1mol/L磷酸盐缓冲液-1%乙醇时，得到CAP的最高电流响应。在0.1～10mmol/L范围，CAP浓度与电流响应呈线性关系。采用流动注射分析奶中CAP含量，装有BDD电极的薄层流池作为电流检测器，在-0.7V(Ag/AgCI电极)进行实验。在0.1～50umol/L时，电流响应与CAP浓度呈线性，LOD为0.03umol/L，回收率为93.9%～103%。

(5)毛细管电泳法(capillaryelctrophoresis，CE)

CE兼有高压电泳的高速、高分辨率和液相色谱(LC)灵活高效的优点，可简化样品前处理，多残留分析自动化，但是由于样品量太少，限制了检测灵敏度。

Kowalski等建立了测定禽组织中CAP、TAP和FF的CE方法。样品用乙腈提取和除蛋白，SPE净化后用CE测定。用未涂层熔融石英毛细管柱(57cm×75umi.d.)分离，25mmol/L十水四硼酸钠溶液作为分离缓冲液，电压20kV，温度22℃。方法运行时间小于7min，回收率大于82.2%。该作者又开发了动物组织中CAP、TAP和FF的胶束电动色谱(MEKC)测定方法。组织样品用乙腈提取和去除蛋白，再用C₁₈柱净化，MEKC检测。方法LOD为1.3～7.8ng/g，LOQ为4.5～26.1ng/g；日内和日间精密度分别小于8.4%和14.9%；样品添加回收率超过77.2%。Zhang 等基于荧光标记的CAP半抗原与游离CAP竞争结合数量有限的抗CAP抗体原理，开发了动物源食品中CAP的毛细管电泳免疫分析-激光诱导荧光(CEIA-LIF)检测方法。聚(N-异丙基丙烯酰胺)(pNIPA)水凝胶加入分离液中，作为动态调节剂以降低吸附和提高重现性。方法线性范围为0.008～5ug/L，LOD为0.0016ug/L，是常规ELISA方法的20倍。该方法在15min可达到平衡，CE在5min内分离得到分析结果。用于动物源食品分析，LOD为0.1ug/kg。

Kowalski 等建立了血浆中FF的CE-UVD检测方法。样品处理简单，不需要梯度洗脱和衍生，线性范围在0.05～10ug/mL之间，LOD为0.015ug/mL。与HPLC方法相比，灵敏度更高，分析时间仅为1/2。该作者还建立了火鸡血液中TAP的CE分析方法。线性范围在0.2～500ug/mL之间，LOD为70ng/mL，LOQ为200ng/mL。Jin等采用碳纤维微盘阵列电极，在-1.00V恒电位(相对于饱和甘汞电极)建立了血清中CAP的CZE柱端安培检测方法。分离缓冲液为8.4×10^-4 mol/L HOAc和3.2×10^-3 mol/L NaOAc，电压20kV，进样电压5kV，进样时间5s。方法LOD为9.1×10^-7 mol/L，RSD为1.1%(迁移时间)和2.3%(电泳峰值电流)。

Vera-Candioti 等建立了牛奶中CAP的毛细管区带电泳-二极管阵列检测器(CZE-DAD)分析方法。采用阶乘和中心复合设计使优化实验数量减少。多重响应标准用于优化CZE的分离，在缩短分析时间的同时，具有良好的峰值分辨率和低毛细管电流。牛奶样品用三氯乙酸沉淀蛋白，再用二氯甲烷LLP，过SPE净化后，进CE分析。方法LOD和LOQ分别为30μg/L和100ug/L，回收率在93.08%～102.89%之间。Santos等开发了一种简单快速地测定牛奶中CAP的CE方法。牛奶沉淀蛋白后，用C₁₈柱净化，CE-UVD在210nm测定。58.5cm熔融石英毛细管分离，2.7×10^-2 mol/L磷酸二氢钾和4.3×10^-2 mol/L四硼酸钠(pH 8)作为分离缓冲液，电压18kV，温度25℃。方法回收率为72%，RSD小于5%。

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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