3.2.2.6测定条件

(1)液相色谱条件

色谱柱：Atlantis-C₁₈，3.5um，150mm×2.1mm(内径)或相当者；柱温：40℃；进样量：30uL；流动相流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液，流动相C为甲醇。梯度洗脱条件见表3-3。

(2)质谱条件

离子源：电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：正离子扫描；检测方式多反应监测(MRM)；电喷雾电压(IS)：5000V；辅助气(AUX)流速：7L/min；辅助气温度(TEM)：550℃；聚焦电压(FP)：150V；链霉素、双氢链霉素和卡那霉素的质谱参数见表3-4。

3.2.2.7分析条件的选择

(1)提取净化条件的选择

1)提取液的选择

氨基糖苷类药物具有较强的极性，羧酸型柱是弱阳离子交换柱，因此提取液的pH及缓冲液的浓度对结果尤为重要，本方法实验了用阴性蜂蜜样品，添加相同量的标准，按相同方法，用不同pH和不同浓度的磷酸盐溶液作为提取液做条件实验，实验数据见表3-15和表3-16。

表3-15 0.2mol/L磷酸盐缓冲溶液不同pH对结果的影响

表3-16 pH=8.0 不同磷酸盐缓冲溶液浓度对结果的影响

从表3-15和表3-16中看出，磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.2mol/L、pH为8.0时，三种抗生素响应信号最高。

2)固相萃取柱的选择

本方法实验了Oasis HLB(60 mg，3 mL)、BAKERBOND SPE ^TM (500mg，3 mL)、SUPELCLEAN ^TM LC-SCX (500mg，3mL)、羧酸型(500mg，3mL)和BAKERBOND SPE ^TM C₁₈ (500mg，3mL)单柱和双柱及不同搭配的净化效果和回收率。实验表明，Oasis HLB(60mg，3mL)串联羧酸型(500mg，3mL)双柱净化效果最好和回收率最高。因此，本方法选择这两个固相萃取柱为净化柱。

3.2.2.8线性范围和测定低限

链霉素、双氢链霉素和卡那霉素浓度为2.5ug/L、5.0ug/L、10.0ug/L、20.0ug/L、50.0ug/L和100.0μg/L，在规定的色谱质谱条件下，进样量30μL，进行测定，用溶液浓度对链霉素、双氢链霉素和卡那霉素定量离子对的响应值峰面积作图，得到的标准曲线是呈线性关系的，符合定量要求，链霉素相关系数为R=0.9991，其回归方程为Y=1340+1560X，线性范围范围为2.5～100.0ug/kg，双氢链霉素相关系数为R=0.9994，其回归方程为Y=4220+1010X，线性范围范围为2.5～100.0ug/kg，卡那霉素相关系数为R=0.9989，其回归方程为Y=7140+1620X，线性范围范围为2.5～100.0ug/kg，有良好的线性关系。链霉素、双氢链霉素和卡那霉素添加为5.0ug/kg时，其信噪比均大于10，获得较好的回收率及精密度，由此确定链霉素、双氢链霉素和卡那霉素的检测低限分别为5.0μg/kg。

相关链接：蜂蜜中链霉素、双氢链霉素和卡那霉素残留量的测定适用范围和方法原理

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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