2.2.4.6测定

(1)液相色谱条件

色谱柱：Lichrospher100 RP-185um 250mm×4.6mmi.d.或相当者；流动相：乙腈+0.01mol/L乙酸铵溶液(12+88)；流速：0.8mL/min；柱温：35℃；进样量：40μL；分流比：1：3。

(2)质谱条件

离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应检测；电喷雾电压：5500V；雾化气压力：0.076MPa；气帘气压力：0.069MPa；辅助气流速：6L/min；离子源温度：350℃；定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表2-15。

(3)液相色谱-串联质谱测定

用混合标准工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度(ng/mL)为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中16种磺胺的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，16种磺胺的参考保留时间见表2-15。16种磺胺的标准总离子流图见图2-3和图2-4。

2.2.4.7分析条件的选择

(1)样品提取液pH的选择

分别使用五个不同pH的磷酸溶液作为蜂蜜样品提取液，在同一添加水平，相同实验条件下对蜂蜜样品进行回收率实验，实验数据见表2-19。

表2-19 不同pH的磷酸溶液对磺胺回收率(%)的影响

从表2-19中数据可以看出,在pH=1～3范围内,16种磺胺的回收率基本上在85%以上,而在pH=2时，16种磺胺的回收率基本上在90%以上，为最高。当pH>3时，随pH的增大而回收率明显下降，因此在本方法中选择pH=2的磷酸溶液作为蜂蜜样品提取液。

(2)洗脱剂浓度和用量的选择

为了确定从阳离子交换柱上洗脱磺胺类药物时所需磷酸盐缓冲溶液的浓度和用量，根据以往的经验和苯磺酸型阳离子交换柱的特点，分别用五个浓度的磷酸盐缓冲溶液(pH=8)和不同体积进行实验，实验数据见表2-20。

表2-20 磷酸盐缓冲溶液浓度和用量对磺胺回收率(%)的影响

从表2-20中数据可以看出，磷酸盐缓冲溶液浓度在0.05～0.2 mol/L区间，随着浓度的增加其磺胺类药物的回收率逐步增高，而当磷酸盐缓冲溶液的浓度≥0.2mol/L后，其回收率是基本稳定的。但用上述洗脱液再过Oasis HLB柱，其磺胺药物的回收率又随样液中磷酸盐的浓度增大而降低，这可能是高浓度的磷酸盐对Oasis HLB柱吸附磺胺类药物产生屏蔽效应所致，因此本方法选择0.2 mol/L磷酸盐缓冲溶液作为苯磺酸型阳离子交换柱的洗脱剂；磺胺类药物的回收率随着0.2mol/L磷酸盐缓冲溶液的用量增加而增高，但当磷酸盐缓冲溶液的用量达到40mL，8种磺胺的回收率均达到95%以上，即使再增大洗脱剂的用量，其回收率趋于稳定，因此，洗脱剂的用量确定为40mL。

(3)过Oasis HLB柱样液pH的确定

采用固相萃取技术净化样品，其pH对其回收率的影响是很大的，不同pH的目标物质过柱时要求其样液的pH也不同，为了找出磺胺类药物过Oasis HLB柱最佳pH，用磷酸将40 mL 0.2 mol/L磷酸盐缓冲溶液分别调至6个不同的pH，相同量的标准，进行回收率实验，实验数据列于表2-21。从表2-21可以看出，过Oasis HLB固相萃取柱时，16种磺胺在pH=2～6范围内，随pH的增大，其响应值也相应增高，当达到pH=6左右时，其响应值达到最大值，因此，在本方法中确定pH=6为样液过Oasis HLB柱时的最佳pH。

表2-21 过Oasis HLB固相萃取柱时样品溶液pH对磺胺响应值的影响

相关链接：蜂蜜中16种磺胺残留量的测定液相色谱-串联质谱法（一）

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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