国家质检总局在《企业生产婴幼儿配方乳粉许可条件审查细则(2010年版)》中，首次要求企业对购入的生乳和原料乳粉批批进行三聚氰胺检验，强调三聚氰胺为出厂自行检验项目，并要求相关企业须有两名以上可独立检验三聚氰胺的检验人员。

关于三聚氰胺的测定，我国在2008年10月和11月分别出台了《GB/T22388-2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》和《GB/T22400-2008原料乳三聚氰胺快速检测》。GB/T22388-2008规定了三种测定方法，即高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)和气相色谱-质谱联用法(GC-MS)和GC-MS/MS)。

本实训采用高效液相色谱法，定量限为2mg/kg(依据GB/T22388-2008第一法)。

1.目的要求

(1)理解高效液相色谱法测定原料乳及乳制品中三聚氰胺的原理。

(2)掌握高效液相色谱仪仪器条件建立方法和操作。

2.实训原理

试样中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测定，外标法定量。

3.实训用品

(1)高效液相色谱仪：安捷伦1100型配置紫外检测器或二极管阵列检测器。

(2)分析天平：感量为0.0001g和0.01g。

(3)离心机：转速不低于4000r/min。

(4)超声波水浴。

(5)固相萃取装置。

(6)水浴氮气吹干仪：配置氮气钢瓶或其他氮气源。

(7)旋涡混合器。

(8)具塞塑料离心管：50mL。

(9)研体。

(10)混合型阳离子交换固相萃取柱：规格60mg 3mL，推荐使用WATERS公司MCX或博纳-艾杰尔公司产品PCX或相当者。

(11)甲醇：色谱纯。

(12)乙腈：色谱纯。

(13)氨水：含量为25%～28%。

(14)三氯乙酸。

(15)柠檬酸。

(16)辛烷磺酸钠：色谱纯。

(17)甲醇水溶液：准确量取50mL甲醇和50mL水，混匀后备用。

(18)三氯乙酸溶液(1%)：准确称取10g三氯乙酸于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用。

(19)离子对试剂缓冲液：准确称取2.10g柠檬酸和2.16g辛烷磺酸钠，加入约980mL水溶解，调节pH至3.0后，定容至1L备用。

(20)氨化甲醇溶液(5%)：准确量取5mL氨水和95mL甲醇，混匀后备用。

(21)三聚氰胺标准品：CAS108-78-01，纯度大于99.0%。

(22)三聚氰胺标准储备液：准确称取100mg(精确到0.1mg)三聚氰胺标准品于100mL容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL的标准储备液，于4℃避光保存。

(23)三氯乙酸溶液饱和的正己烷(可选)：取200mL正己烷和100mL三氯乙酸溶液一起放入500mL分液漏斗中，充分混合振荡，静置分层，取上层正己烷备用。

除非另有规定，所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682-2008规定的一级水。

4.安全提醒

(1)三氯乙酸具有吸入毒害性、腐蚀性，需在通风橱内使用和配置，操作使用橡胶手套。

(2)甲醇有较强的毒性，经消化道、呼吸道或皮肤摄入都会产生毒性反应，其蒸气能损害人的呼吸黏膜和视力，须在通风橱内使用和配置，操作使用橡胶手套。

(3)离心机操作时样品须呈对称放置，放置前应确保对称方向上的样品重量一致，以有效避免离心机转轴发生偏转，造成设备损坏甚至发生危险。

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文章来源：《食品理化检测技术》

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