④确证试验：为了证实薄层板上样液荧光系由黄曲霉毒素B1产生的，加滴三氟乙酸，产生黄曲霉毒素B1的衍生物，展开后此衍生物的比移值约在0.1。于薄层板左边依次滴加两个点。

第一点：10uL 0.04ug/mL黄曲霉毒素B1标准使用液。

第二点：20uL样液。

于以上两点各加一小滴三氟乙酸盖于其上，反应5min后，用吹风机吹热风2min后，使热风吹到薄层板上的温度不高于40℃。再于薄层板上滴加以下两个点。

第三点：10uL 0.04ug/mL.黄曲霉毒素B，标准使用液。

第四点：20uL样液。

再展开同③，在紫外光灯下观察样液是否产生与黄曲霉毒素B1标准点相同的衍生物。未加三氟乙酸的三、四两点，可依次作为样液与标准的衍生物空白对照。

定量：样液中的黄曲霉毒素B1荧光点的荧光强度如与黄曲霉毒素B1标准点的最低检出量(0.0004ug)的荧光强度一致，则样品中黄曲霉毒素B1含量即为5ug/kg。如样液中荧光强度比最低检出量强，则根据其强度估计减少滴加微升数或将样液稀释后再滴加不同微升数，直至样液点的荧光强度与最低检出量的荧光强度一致为止。滴加式样如下：

第一点：10uL黄曲霉毒素B1标准使用液(0.04ug/mL)。

第二点：根据情况滴加10uL样液。

第三点：根据情况滴加15uL样液。

第四点：根据情况滴加20uL样液。

6.结果计算

式中x——试样中黄曲霉毒素B1的含量，ug/kg

V₁——加入苯-乙腈混合液的体积，mL

V₂——出现最低荧光点时滴加样液的体积，mL

V——样液的总稀释体积，mL

m——加入苯-乙腈混合液溶解时相当试样的质量，g

0.0004——黄曲霉毒素B1的最低检出量，ug

结果表示到测定值的整数位。

7.要点提示

(1)样品中黄曲霉毒素的提取及薄层色谱法本身的操作影响方法的准确性。稍有不慎，就会造成结果的不准确甚至整个检验过程的失败。

(2)薄层板的厚薄是否一致将直接影响到测定的准确性。因此，除在制板过程中要加以严格控制外，还要对所制备的薄层板加以挑选。将其放于紫外光灯(254nm)下检视，检查其均匀度，表面应平整、无麻点、无气泡、无破损及无污染，方可备用。

(3)要求点样时必须注意勿损伤薄层表面。

(4)单向展开法适用于杂质干扰较小的提取液。而对于杂质干扰严重的提取液，如油料或油脂样品，单向展开法会产生沿展开方向留下的杂质底色，无法观察结果，因此只能采用双向展开法。

(5)层析后的薄层板在紫外光下照射太久会引起荧光减弱甚至消失，观察时应注意这点。

相关链接：酱油中黄曲霉毒素B1的测定（三）

文章来源：《食品理化检测技术》

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