克伦特罗为强效选择性β-受体激动剂，可明显促进动物生长，并增加瘦肉率，因而俗称“瘦肉精”。20世纪90年代，受当时科研水平所限，我国部分地区曾错误地将其作为先进科研成果引入，并作为饲料添加剂进行推广。之后一系列由含克伦特罗引发的食物中毒事件发生后，我国农业部、卫生部、国家药品监督管理局在2002年9月10日发布的《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中，将盐酸克伦特罗等列为禁用药品。然而仍有极个别养殖户因重视程度不够或受经济利益驱使，在饲料里私自添加“瘦肉精”，使“健美猪”等引发的中毒事件频繁发生。

对动物性食品中克伦特罗残留量的测定，GB/T5009.192-2003规定了三种方法：气相色谱-质谱法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)和酶联免疫法(ELISA筛选法)。

本实训采用高效液相色谱法(HPLC)(依据GB/T5009.192-2003第二法)。

1.目的要求

(1)了解高效液相色谱仪的工作原理及工作条件的选择方法。

(2)掌握高效液相色谱法测定动物性食品中克伦特罗残留量的原理和方法。

(3)学会使用高效液相色谱仪，学会识别色谱图。

2.实训原理

固体试样剪碎，用高氯酸溶液匀浆，液体试样加入高氯酸溶液，进行超声加热提取后，用异丙醇+乙酸乙酯(40+60)萃取，有机相浓缩，经弱阳离子交换柱进行分离，用乙醇+浓氨水(98+2)溶液洗脱，洗脱液浓缩，流动相定容后在高效液相色谱仪上进行测定，外标法定量。

3.实训用品

(1)高效液相色谱仪。

(2)水浴超声清洗器。

(3)磨口玻璃离心管：11.5cm(长)×3.5cm(内径)，具塞。或相当者。

(4)5mL玻璃离心管或相当者。

(5)酸度计。

(6)离心机。

(7)振荡器。

(8)旋转蒸发器。

(9)旋涡式混合器。

(10)微孔过滤膜(0.45um，水相)。

(11)弱阳离子交换柱(LC-WCX)3mL或相当者。

(12)N₂-蒸发器。

(13)匀浆器。

(14)克伦特罗(clenbuterol hydrochloride)，纯度≥99.5%。

(15)超纯水。

(16)磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·2H₂O)：分析纯。

(17)氢氧化钠：分析纯。

(18)氯化钠：分析纯。

(19)高氯酸：分析纯，纯度70%。

(20)浓氨水：分析纯。

(21)异丙醇：HPLC级。

(22)乙酸乙酯：HPLC级。

(23)甲醇：HPLC级。

(24)乙醇：HPLC级。

(25)高氯酸溶液(0.1mol/L)：准确称取14.35g高氯酸(分析纯，70%)，用超纯水稀释并定容至1L，摇匀。

(26)氢氧化钠溶液(1mol/L)：准确称取40g氢氧化钠，用超纯水溶解并定容至lL，摇匀。

(27)磷酸二氢钠缓冲液(0.1mol/L，pH=6.0)：准确称取15.6g磷酸二氢钠，用超纯水溶解并定容至1L，摇匀。

(28)异丙醇+乙酸乙酯(40+60)。

(29)乙醇+浓氨水(98+2)。

(30)甲醇+水(45+55)。

(31)克伦特罗标准溶液：准确称取克伦特罗标准品用甲醇配制成浓度为250mg/L的标准储备溶液，贮存于冰箱内(0～4℃)；使用时用甲醇稀释成0.5mg/L的克伦特罗标准使用液，进一步用甲醇+水(45+55)适当稀释。

相关链接：食品中兽药残留量的测定

文章来源：《食品理化检测技术》

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