《GB/T5009.87-2003食品中磷的测定》中规定了测定各类食品中总磷的方法有分光光度法和原子吸收光谱法。
以下介绍分光光度法测定食品中的总磷(依据GB/T5009.87-2003第一法)。

1.原理

食物中的有机物经酸氧化，使磷在酸性条件下与钼酸铵结合形成磷钼酸铵。此化合物被对苯二酚、亚硫酸钠还原成蓝色化合物——钼蓝。用分光光度计在波长660mm处测定钮蓝的吸光值，以定量分析磷含量。

2.试剂

(1)硫酸：相对密度1.84。

(2)高氯酸-硝酸消化液：1+4混合液。

(3)15%硫酸溶液：取15ml硫酸徐徐加入到80mL水中混匀，冷却后用水稀释至100mL。

(4)铝酸铵溶液：称取0.5g铝酸铵[(NH₃)₆Mo₇O₂·4H₂O]，用15%硫酸稀释至100mL。

(5)对苯二酚溶液：称取0.5g对苯二酚于100mL水中，使其溶解，并加入一滴浓硫酸(减缓氧化作用)。

(6)亚硫酸钠溶液：称取20g无水亚硫酸钠于100mL水中，使其溶解。此溶液需于实验前临时配制，否则可使钼兰溶液变浑浊。

(7)100ug/mL磷标准储备液：准确称取在105℃下干燥的磷酸二氢钾(优级纯)0.4394g，置于1000mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。此溶液每1mL含100ug磷。

(8)10ug/mL磷标准使用液：准确吸取10mL磷标准储备液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液每1mL含10ug磷。

3.仪器

(1)实验室常用设备。

(2)分光光度计。

4.操作步骤

(1)试样处理称取各类食物的均匀干试样0.1～0.5g，或湿试样2～5g于100mL凯氏烧瓶中，加入3mL硫酸、3mL高氯酸-硝酸消化液，置于消化炉上。瓶中液体初为棕红色，待液体变为无色或微带黄色清亮液体时，即消化完全。将溶液放冷，加20mL水，赶酸。冷却，转移至l00mL容量瓶中，用水多次洗涤凯氏烧瓶，洗涤液合并倒入容量瓶内，加水至刻度，混匀。此溶液为试样测定液。

取与消化试样同量的硫酸、高氯酸-硝酸消化液，按同一方法做空白溶液。

(2)磷标准曲线绘制准确吸取磷标准使用液0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL(相当于含磷量0，5，10，20，30，40，50ug)，分别置于20mL具塞试管中，依次加入2mL钼酸铵溶液摇匀，静置几秒钟。加入1mL亚硫酸钠溶液、1mL对苯二酚溶液，摇匀。加水至刻度，混匀。静置0.5h以后，在分光光度计660nm处测定吸光度。以测出的吸光度对磷含量绘制标准曲线。

(3)测定准确吸取试样测定液2mL及同量的空白溶液，分别置于20mL具寨试管中，以下操作步骤同标准曲线。以测出的吸光度在标准曲线上查得试样液中的磷含量。

5.结果计算

式中X——试样中磷的含量，mg/100g

m₁——由标准曲线查得或回归曲线算得试样测定液中的磷的质量，mg

V₁——试样消化液定容总体积，mL

V₂——测定用试样消化液的体积，mL

m——试样的质量，g

计算结果表示到小数点后两位。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过5%。

6.要点提示

(1)本法适用于各类食品中总磷的测定，方法检出限为2ug，线性范围为5～50ug。

(2)对苯二酚有毒，使用时要当心。

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文章来源：《食品理化检测技术》

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