二、 黄酮类化合物的含量测定

黄酮类化合物由于含有特定的化学结构，因此，大多数化合物在可见光呈现颜色(或加适当的显色剂后呈色)，在紫外光区有较强的吸收，可采用多种方法进行定量分析。常用的方法有重量法、比色法、荧光法、分光光度法、高效液相色谱法、薄层色谱法及气相色谱法等。中药制剂中黄酮类化合物的含量测定，可根据要求测定总黄酮含量、总黄酮类单体成分的含量或二者同时测定。

总黄酮含量测定：含黄酮类化合物的原料和制剂经过一定的提取分离后，可直接于最大吸收波长处测定其吸收度。在复方制剂中，由于其他组分吸收的干扰，多需进行比色测定。最常用的是以三氯化铝试液作显色剂，进行比色测定。测定时，一般用芦丁作为标准品，0.1mol/L三氯化铝(或10%硝酸铝)作显色剂，加入适量1mol/L硝酸钾，放置40分钟，照2015年版《中国药典》四部紫外-可见分光光度法(通则0401)试验。在420nm±1nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。测定单一的黄酮类成分或总黄酮，则可以配成适当浓度的溶液，直接进行比色。如欲测定中药中总黄酮的含量，需将中药以稀醇提取，提取液稀释到适当浓度(若在稀释时发生沉淀或混浊时，则另取一定量提取液，小心蒸干，以热水溶解残渣，滤过，滤液稀释至一定体积)。取此液定量，同上法比色，以同一滤液为空白对照，从标准曲线计算含量。

薄层色谱法是测定制剂中单体黄酮类成分的有效方法之一。中药制剂组分多，样品多经有机溶剂或水提取后，往往需要经过硅胶或聚酰胺进行层析，分离得该化合物的洗脱液后，再按上法进行测定，也可用薄层扫描法(单波长或双波长法)直接在薄层板上扫描测定。黄酮类化合物在紫外光区有较强的吸收，使用高效液相色谱法检测灵敏度极高。制剂中含有的黄酮类化合物，只要经过适当的预处理，选择好色谱条件，均能得到满意的结果。紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法常用于黄酮类化合物的含量测定。

三、皂苷的含量测定

皂苷的化学结构比较复杂，其含量测定方法常用的有重量法、中和法、薄层色谱法、比色法、紫外分光光度法、高效液相色谱法等。

在中成药制剂中，皂苷类成分的定量分析可分为总皂苷测定、皂苷元测定和单体皂苷测定。皂苷的含量测定往往由于一些物质(主要是糖)的存在而受到干扰，因此在测定前首先要进行分离，以除去杂质。一般采用溶剂法，最常用的有机溶剂是正丁醇。总皂苷的含量测定一般需要用适当的溶剂提取。由于皂苷在极性溶剂中溶解度较大，因此提取溶剂可为各种浓度的甲醇(70%～95%)、乙醇、异丙醇、丁醇、戊醇。提取后经分离得到总皂苷成分，分离可用有机溶剂溶解，用水饱和的正丁醇萃取，也可用大孔吸附树脂处理后用溶剂洗脱。

测定总皂苷类成分最常用的方法是比色法，也有用重量法。常用的显色剂有香草醛-高氯酸，香草醛-硫酸等。显色后在一定波长范围内测定吸收度值，计算，即得。

测定皂苷元含量的方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法和比色法。但在中药制剂中如无特殊原因，应尽量避免将药品水解后测定水解产物，因为如此测定已不能客观反映药品自身的质量，更无法进行稳定性考察。单体皂苷的含量测定常用薄层色谱法、高效液相色谱法。

1. 比色法用比色法测定中药制剂中总皂苷或总皂苷元的含量时，可选用单体皂苷或皂苷元作对照品，但要注意单体皂苷或皂苷元与总皂苷的换算系数。

2. 高效液相色谱法随着高效液相色谱仪器的普及，高效液相色谱法已广泛应用于皂苷类的定量分析中。由于皂苷类成分中一般无共轭体系，紫外光区往往没有明显的特征吸收，因此，常采用末端吸收作为测定波长进行测定。

四、蒽醌类成分的含量测定

1. 游离蒽醌的测定中药中游离蒽醌的含量一般不高，且为脂溶性的，此部分多用弱极性溶剂如乙醚、三氯甲烷等提取后加碱进行比色测定。方法是称取中药或中药制剂适量，在索氏提取器中用三氯甲烷回流提取至无色，三氯甲烷提取液转移至分液漏斗中，以2%氢氧化钠-2%氢氧化氨混合碱液分次提取至无色，合并碱液，用少量三氯甲烷洗涤，弃去三氯甲烷液，碱液调至一定体积，若不澄清，可用垂溶漏斗过滤，滤液在沸水浴中加热4分钟，用冷水冷却至室温，30分钟后比色测定。

2. 结合蒽醌的测定蒽醌苷类成分极性较强，可用极性溶剂提取，通常是取游离蒽醌测定项下的药渣将苷提出，水解成苷元后再测定；也可将药渣先行酸水解，然后用非极性溶剂提取苷元后测定；或取待测样品先行酸水解，然后用非极性溶剂提取苷元后测定，其结果为总蒽醌含量，从中减去游离蒽醌含量，即得结合蒽醌的含量。

3. 蒽醌类单体成分的测定中药制剂中蒽醌类单体成分的测定一般要将样品水解后再进行测定，测定方法主要有薄层扫描法和高效液相色谱法。

薄层扫描法为蒽醌类成分常用定量分析方法，经层析分离后，可在可见光、紫外光及荧光下扫描测定。蒽醌类成分在紫外及可见光下均有强吸收，利用高效液相色谱(紫外-可见光检测器)测定蒽醌类单体成分，具有灵敏、准确、简便等特点。此外，高效液相色谱法在含蒽醌类化合物的中药制剂分析中应用较多。

相关链接：中药有效成分的含量测定（二）

文章来源：《实用中药药品检验检测技术指南》

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