宝藿苷Ⅰ（淫羊藿次苷II，BaohuosideⅠ）为小檗科淫羊藿属（EpimediumL）多种植物中的一种黄酮类化合物。药理研究表明宝藿苷Ⅰ具有抗肿瘤、抗骨质疏松等作用。《中国药典》（2010年版）规定宝藿苷Ⅰ为淫羊藿饮片的质量控制成分。笔者根据JJF1006–1994等技术文件研制了宝藿苷Ⅰ化学纯度有证标准物质，该标准物质可应用于相关化学药品、中药产品、保健品的质量控制，为实现我国准确定量检测药品与相关物质提供了标准物质资源，具有实际应用价值。

宝藿苷Ι分子结构如图1所示。

1实验部分

1.1主要仪器与试剂

液相色谱–质谱仪：Agilent1100型，液相色谱仪（美国Agilent公司）和3200Qtrap型三重四极杆–离子阱复合型质谱仪（美国AB公司）；核磁共振仪：AV–600型，德国Bruker公司；高效液相色谱（HPLC）仪：2690型泵模块，996型DAD紫外检测器，Empower化学工作站，美国Waters公司；毛细管电泳仪：P／ACE5000型，具紫外检测器，配ACEStation工作站，美国贝克曼库尔特有限公司；卡尔费林水分测定仪：DL39型，瑞士MerrlerToledo公司；热重分析仪（TGA）：Pyris1TGA型，美国PE公司；乙腈：色谱纯，美国FisherScientific公司；卡尔费休试剂：

YDRANAL®–CoulomatAG–H型，德国Riedel–deHaen公司；

超纯水：美国Milli-Q超纯水机制备。

1.2标准物质的制备和纯化

研制的宝藿苷Ⅰ由淫羊藿提取物分离纯化获得，淫羊藿提取物购自陕西慧科植物开发有限公司。将淫羊藿提取物通过正相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等分离纯化手段获得纯度流分，用HPLC法检测宝藿苷Ⅰ的纯度，合并纯度大于99.6％的流分，重结晶，常温干燥，对宝藿苷Ⅰ进行结构鉴定，用HPLC法对宝藿苷Ⅰ标准物质进行均匀性初验，分装到洁净的的棕色玻璃瓶中。共分装230瓶，每瓶约20mg，常温、密封储存在干燥处。

1.3定性分析

用液相色谱–质谱联用法和核磁共振技术对宝藿苷Ⅰ进行定性确认。

1.4纯度定值分析

宝藿苷Ⅰ纯度标准物质采用HPLC法和胶束电动毛细管色谱（MECC）法进行定值。

1.4.1样品溶液的制备

精密称取宝藿苷Ⅰ标准物质2mg于10mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容至标线，配制成200μg／mL宝藿苷的甲醇溶液备用。

1.4.2HPLC仪工作条件

色谱柱：DikmaDiamonsilC18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈（A）–水（B），流速为1.0mL／min；梯度淋洗程序：0～15min，20%～28%B；

15～20min，28%～35%B；20～40min，35%～39%B；

40～60min，39%～90%B；60～62min，30%～100%B；

柱温：30℃；检测波长：260，265，270，275nm；定值波长：270nm；进样质量浓度：1mg／mL。

1.4.3MECC仪工作条件

毛细管：涂层熔融石英毛细管（47cm×50mm，河北鑫诺光纤色谱有限公司）；分离缓冲液：

10mmol／LNa2B4O7–10mmol／LH3BO3–60mmol／L十二烷基硫酸钠（SDS）混合溶液；样品介质：10mmol／LNa2B4O7–10mmol／LH3BO3–60mmol／LSDS溶液；分离电压：13kV；进样质量浓度：0.2mg／mL；进样时间：3s；进样压力：3447.5Pa；分离温度：25℃；检测波长：200nm。

1.5杂质分析

宝藿苷Ⅰ标准物质样品的杂质分析主要包括水分（含挥发性成分）和无机元素分析。

宝藿苷Ⅰ标准物质样品的水分用TGA法测定：取样品8mg，初始温度35℃，稳定1min后，以10℃／min升温至105℃（目的是使样品恒重），保持温度1h，测定损失的质量。

采用ICP–MS法分析测定样品中73种无机元素的含量。若各部分杂质含量小于0.01%，则可忽略不计。

1.6样品均匀性和稳定性考察

根据《一级标准物质技术规范》的要求对宝藿苷Ⅰ标准物质样品进行均匀性检验。具体抽样检验方法：随机抽取15瓶，进行瓶间均匀性检验；在任意一瓶取7个子样，进行瓶内均匀性检验。检验方法为定值方法的HPLC法，测量数据进行F检验和t检验。标准物质的稳定性考察按先密后疏的原则，在一定时间间隔内选择定值方法即HPLC法，检测在规定条件下保存的标准物质纯度随时间的变化情况，通常情况下，分别在第1，3，6，12个月进行稳定性监测。每次取5瓶，每瓶取一个子样，测定3次，计算平均值，把5瓶测量结果平均值作为检测结果。检测结果的变动在定值结果不确定度范围内作为判定标准物质稳定的原则。

转载自中国分析计量网