6 试料的制备与保存

6.1 试料的制备

取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶，混合均质。

—取均质后的供试样品，作为供试试料。

—取均质后的空白样品，作为空白试料。

—取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

6.2 试料的保存

-20℃以下保存。

7 测定步骤

7.1 提取

称取试料(5±0.05)g,于离心管中，加碳酸盐缓冲液5mL,加乙酸乙酯10mL,混匀，6000r/min离心10min,取上清液于茄形瓶中，再加乙酸乙酯10mL萃取一次，合并两次上清液，于50℃水浴旋转蒸发至干，加碳酸盐缓冲液5mL溶解残余物，备用。

7.2 净化

C₁₈柱依次用水3mL、甲醇3mL和碳酸盐缓冲液3mL活化，取备用液过柱，用水3mL淋洗，用甲醇5mL洗脱，收集洗脱液，于50℃水浴氮气吹干，用流动相1.0mL溶解残余物，滤膜过滤，供高效液相色谱测定。

7.3 标准曲线的制备

准确量取10/ug/mL左旋咪唑标准工作液适量，用流动相稀释，配制成浓度为10、20、50、100、200、400和800ug/L的系列标准工作液，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

7.4 测定

7.4.1 液相色谱条件

色谱柱：C₁₈(150mm×4.6mm,粒径5um),或相当者；

流动相：0.02mol/L磷酸二氢钠二乙胺缓冲溶液+甲醇(70+30,v/v)；

流速：1mL/min；

检测波长：220nm；

进样量：50uL；

柱温：30℃。

7.4.2 测定法

取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算。标准溶液及试样溶液中左旋咪唑响应值应在仪器检测的线性范围之内。

7.5 空白试验

除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。

8 结果计算与盐

试料中左旋咪唑类的残留量(ug/kg)：按下式计算

式中：

X—供试试料中左旋咪唑残留量，ug/kg；

A—试样溶液中左旋咪唑的峰面积；

A_s—标准工作液中左旋咪唑的峰面积；

C_s—标准工作液中左旋咪唑的浓度，ug/L

V—溶解残余物所用流动相体积，mL；

m—供试试料质量，g。

注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。

9 检测方法灵敏度、准确度、精密度

9.1 灵敏度

本方法的检测限为2.5ug/kg,定量限为5ug/kg。

9.2 准确度

本方法在5～20ug/kg添加浓度水平上的回收率为70%～110%。

9.3 精密度

本方法的批内相对标准偏差≤20%,批间相对标准偏差≤20%。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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