1 范围

本标准规定了婴幼儿食品和乳品中脲酶的测定方法。

本标准适用于婴幼儿食品和乳品中脲酶的定性检验。

2 原理

脲酶在适当酸碱度和温度条件下，催化尿素转化成碳酸铵。碳酸铵在碱性条件下生成氢氧化铵,与纳氏试剂中的碘化钾汞复盐作用生成棕色的碘化双汞铵。

3 试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682規定的三级水。

3.1 试剂

3.1.1 尿素(H₂NCONH₂)。

3.1.2 钨酸钠(Na₂WO₄.2H₂O)。

3.1.3 酒石酸钾钠(C₄H₄O₆KNa.4H₂O)。

3.1.4 硫酸(H₂SO₄)。

3.1.5 磷酸氢二钠(Na₂HPO₄)。

3.1.6 磷酸二氢钾(KH₂PO₄)。

3.1.7 碘化汞(Hgl₂)。

3.1.8 碘化钾(KI)。

3.1.9 氢氧化钠(NaOH)。

3.2 试剂配制

3.2.1 尿素溶液(10g/L)：称取尿素5g,溶解于500mL水中。保存于棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏,有效期为1个月。

3.2.2 钨酸钠溶液(100g/L):称取钨酸钠50g,溶解于500mL水中。

3.2.3 酒石酸钾钠溶液(20g/L):称取酒石酸钾钠10g,溶解于500mL水中。

3.2.4 硫酸溶液(50mL/L):吸取硫酸25mL,溶解于500mL水中。

3.2.5 磷酸氢二钠溶液：称取无水磷酸氢二钠9.47g,溶于1000mL水中。

3.2.6 磷酸二氢钾溶液：称取磷酸二氢钾9.07g,溶于1000mL水中。

3.2.7 中性缓冲溶液：取磷酸氢二钠溶液611mL,磷酸二氢钾溶液389mL,两种溶液混合均匀。

3.2.8 碘化汞-碘化钾混合溶液：称取红色碘化汞55g,碘化钾41.25g,溶于250mL水中。

3.2.9 纳氏试剂：称取氢氧化钠144g溶于500mL水中，充分溶解并冷却后，再缓慢地移入1000mL的容量瓶中，加入碘化汞-碘化钾混合溶液250mL,加水稀释至刻度，摇匀，转入试剂瓶内，静置后，用上清液。此试剂需棕色瓶保存，冰箱中冷藏，有效期为1个月。

4 仪器和设备

4.1电子天平：感量为0.01g。

4.2 旋涡振荡器。

4.3 恒温水浴锅：40℃±1℃。

5 分析步骤

取试管甲、乙两支，各称入0.10g试样，再吸入ImL水，振摇0.5min(约100次)。然后分别吸入ImL中性缓冲溶液。向甲管(样品管)吸入ImL尿素溶液，再向乙管(空白对照管)吸入1mL水。两管摇匀后，置于40℃±1℃水浴中保温20min。从水浴中取出两管后，各吸入4mL水，摇匀，再吸入1mL钨酸钠溶液，摇匀，吸入1mL硫酸溶液，摇匀，过滤，收集滤液备用。取上述滤液2mL,分别吸入到二支25mL具塞的比色管中。再各吸入15mL水，1mL酒石酸钾钠溶液，和2mL纳氏试剂，最后用水定容至25mL,摇匀。5min内观察结果。

6 分析结果的表述

分析结果按表1进行判断。

表1结果的判断

7 检出限

该方法为定性法，检出限为0.7U。

相关链接：婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定—雷氏盐分光光度法

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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