1 范围

本标准规定了动物源性食品中利福西明残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。

本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾、牛奶中利福西明残留量的检测和确证。

2 规范性引用

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 方法提要

样品中利福西明残留物用乙腈提取，正己烷除去提取液中脂肪，固相萃取柱净化，洗脱液氮气吹干后，用液相色谱串联质谱测定，外标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 乙腈：高效液相色谱级。

4.2 正己烷：高效液相色谱级。

4.3 异丙醇。

4.4 甲酸：高效液相色谱级。

4.5 无水硫酸钠:650℃灼烧4h，置于干燥器中备用。

4.6 乙腈饱和正己烷：100 mL乙腈中加入100 mL正己烷，充分振荡后，静置分层，取上层液体。

4.7 0.1％甲酸溶液：准确量取1 mL甲酸(4.4)于1L容量瓶中，用水定容至1L。

4.8 乙腈-水溶液(40+60，体积比)：量取40 mL乙腈加入60 mL水中混匀。

4.9 利福西明标准品(Rifaximin,CAS No.80621-81-4)：纯度大于等于95%。

4.10 利福西明标准储备溶液：称取约0.01g利福西明标准品(精确至0.0001g)，用乙腈溶解定容至100 mL，此标准溶液浓度为100 ug/mL，置于-18℃冰箱避光保存。保存期半年。

4.11 利福西明标准工作溶液(1.0 ug/mL)：吸取适量的利福西明标准储备溶液(4.10)，用乙腈配成1.0 ug/mL的标准工作溶液。标准工作溶液置于4℃避光贮存。

4.12 固相萃取小柱：Waters oasis H LB柱，500 mg, 6 mL，或相当者。

4.13 微孔滤膜：0.45 um，有机相。

5 仪器和设备

5.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2 组织捣碎机。

5.3 分析天平：感量分别为0.1 mg和0.01g。

5.4 旋转蒸发器。

5.5 固相萃取装置。

5.6 离心机：4000r/min。

5.7 旋涡混合器。

5.8 均质器。10000 r/min。

6 样品制备与保存

6.1 猪肉、猪肝和猪肾

取约500 g代表性样品，用组织捣碎机充分捣碎，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记。

6.2 牛奶

所取约500 g样品，充分均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记。

6.3 样品保存

猪肉、猪肝和猪肾试样于-18℃以下冷冻避光存放。牛奶试样于0℃～4℃冷藏避光存放。

在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

7 测定步骤

7.1 提取

称取5g试样(精确至0.01g)于50 mL具塞离心管中，加入5g无水硫酸钠(4.5)和20 mL乙腈(4.1)，均质30 s，4000r/min离心5 min，将上清液转移至另一50 mL离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀。加入10 mL乙腈提取，旋涡混合1 min, 4000 r/min离心5 min，合并上清液。加入10 mL乙腈饱和正己烷(4.6)，振荡5 min，静置10 min。收集下层液体于100 mL，浓缩瓶中，加入10 mL异丙醇，40℃旋转蒸发至干，用3 mL乙腈溶解，待净化。

7.2 净化

用5 mL乙腈淋洗固相萃取柱(4.12)，将提取液(7.1)上柱，控制洗脱流速为1 mL/min，收集流出液于10 mL试管中。再用5 mL乙腈洗柱，控制洗脱流速为1 mL/min，合并洗脱液，于45℃下氮气吹干，用乙腈水溶液(4.8)溶解定容至1.0 mL。过0.45 um滤膜，供液相色谱-质谱/质谱测定。

7.3 利福西明基质校准标准溶液的配制

称取七个基质空白样品(称样量为5g)于50 mL具塞离心管中，其中六个空白样品中分别加入适量利福西明标准工作溶液(4.11)，按照样品操作步骤7.1、7.2同步操作，使最终样品溶液中利福西明的浓度分别为10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、250 ng/mL, 500 ng/mL。所得系列利福西明基质标准校准溶液即配即用，用以制作标准曲线。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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