1 范围

本标准规定了饲料中禽源性成分(包括鸡、鸭、鹅、鹤鹑)的实时荧光PCR检测方法。

本标准适用于饲料中禽源性成分(包括鸡、鸭、鹅、鹤鹑)的定性检测。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T 14699饲料采样方法

GB/T 27025检测和校准实验室能力的通用要求

SN /T 0800.1进出口粮油、饲料检验抽样和制样方法

3 术语、定义和缩略语

3.1 定义和术语

下列术语和定义适用于本文件。

3.1.1

实时荧光PCRreal-time fluorescent PCR

实时荧光聚合酶链式反应。

3.1.2

Ct值 cycle threshold Ct

每个反应管内的荧光信号达到设定的阂值时所经历的循环数。

3.2 缩略语

下列缩略语适用于本文件。

FAM(6-carboxyfluorescein) :6-羧基荧光素

TAMRA(6-carboxytetramethylrhodamine) :6-羧基四甲基罗丹明

4 抽样与制样

饲料样品的采集参照GB/T 14699、SN/T 0800.1进行。50g固体样品经粉碎，用120目筛过滤，保持其颗粒大小在0.125 mm以下。

5 测定方法

5.1 原理

在PCR基础上，加入一条与模板DNA匹配的、两端有荧光基团标记的寡核普酸探针。PCR每进行一次循环，合成的新链数与释放的荧光基团数呈对应关系，即PCR产物的量与荧光信号的强度呈对应关系。当荧光信号超过所设定的闽值(Threshold-value)时，荧光信号可被检测出来，仪器检测荧光信号的增加量可以间接地体现样品模板DNA的目的基因的扩增量。样品的模板DNA进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅曲线，从而对饲料中禽源性成分(包括鸡、鸭、鹅、鹤鹑)进行实时荧光PCR检测。

5.2 主要仪器

5.2.1 均质器(可拆卸、可清洗、可高压灭菌)或研钵。

5.2.2 电子天平：感量0.01g。

5.2.3 台式离心机(最高转速15000g)。

5.2.4 微型离心机。

5.2.5 双温水浴(37℃±1℃,65℃±1℃)。

5.2.6 涡旋振荡器。

5.2.7 冰箱(2℃～8℃、-20℃、-80℃)。

5.2.8 超纯水机(分子生物学级别)。

5.2.9 高压灭菌锅。

5.2.10 实时荧光PCR仪。

5.2.11 微量可调移液器及配套吸头(2.5uL～10uL、2uL～20uL,10uL～100uL、50uL～200uL、100uL～1000uL、500uL～5000uL)。

5.2.12 离心管(1.5 mL、2mL、100mL)。

5.2.13 金属网筛：120目，孔径0.125 mm。

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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