1 范围

本标准规定了进出口蜂王浆、蜂王浆冻干粉检验的抽样和液相色谱检验方法。

本标准适用于进出口蜂王浆及蜂王浆冻干粉中10-羟基-a-癸烯酸(10-HDA)的检验。

2 抽样与制样

2.1 检验批

以一报验批为一检验批，每一检验批蜂王浆不多于1t，蜂王浆冻千粉不多于250 kg。

同一检验批商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格、等级等。

2.2 抽样数量

2.3 抽样方法

按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启，从每件内抽取1罐(袋)，每罐(袋)取约50 g，作为原始样品。

2.4 制样方法

原始样品总量不得少于200 g，采用4分法，将样品分为两等份，加封后，标明标记，一份留存，另一份供检验。

2.5 试样保存

2.5.1 试样宜及时检验。

2.5.2 在不能及时检验的情况下，应将试样于-18℃以下冷冻保存。

注：在抽样和制样的操作过程中必须防止样品受到污染和发生含量的变化。

3 检验方法

3.1 方法原理

试样经乙醇处理，溶出10-HDA并沉淀蛋白质，加入内标后用乙醇定容，经离心或放置过夜，直接取上层清液测定。

3.2 试剂和材料

除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

3.2.1 甲醇：紫外光谱纯或优级纯。

3.2.2 无水乙醇：优级纯。

3.2.3 乙醇：95％，优级纯。

3.2.4 内标物：对羟基苯甲酸甲酯。

3.2.5 10-HDA标准品：99.0％以上(GSBx 31001-88原湖北进出口商品检验局研制)。

3.2.6 10-HDA标准溶液：每毫升含1.0mg。称取0.0250g置于抽真空硫酸干燥器内放置24 h的10-HDA，称准至0.0001g，溶于无水乙醇，移入25 mL容量瓶中，用无水乙醇定容。

3.2.7 内标溶液：每毫升含0.65 mg。称取0.650g内标物(准确至0.0002g),溶于无水乙醇，移入1000 mL容量瓶中，用无水乙醇定容。

3.2.8 盐酸溶液：0.01mol/L。

3.2.9 流动相：甲醇-0.01mol/L盐酸溶液(55+45)。

3.3 仪器和设备

3.3.1 高效液相色谱仪：带紫外检测器，记录仪或微处理机。

3.3.2 色谱柱：150 mm×4 mmNova-Pak C₁₈柱，4 um。

3.4 分析步骤

3.4.1 蜂王浆：试样解冻至室温，用玻璃棒充分搅匀，称取0.5g样品，准确至0.0002g，加2 mL 0.01mol/L盐酸溶液，搅匀，加7 mL乙醇搅匀，移入50 mL容量瓶中，加25 mL乙醇，加10.0mL内标溶液，用乙醇定容，立即在超声波浴上混合15 min或在漩涡混匀器上混合15 min，取出，在3000 r/min离心10 min或放置冰箱中过夜等测定。

3.4.2 蜂王浆冻于粉：试样解冻至室温，称取0.16g，准确至0.0002g，置于25 mL烧杯中，加入预先混合好的溶液(含乙醇6 mL , 0.01 mol/L盐酸溶液2 mL)，搅匀，移入50 mL了容量瓶中，加10.0mL内标溶液，用乙醇定容。超声或漩涡混匀等以下步骤同3.4.1。

3.4.3 色谱条件

a)检测波长：210 nm。

b)柱箱温度：40℃。

c)流动相流速：1 mL/min。

3.4.4 标准曲线绘制

精确移取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0和5.0mL 10-HDA标准溶液至10 mL容量瓶中，加2.0mL内标溶液，用无水乙醇定容，分别进样2 uL，用峰面积比值计算，应呈线性。求出校正因子F。

3.4.5 样品测定

每个样品进样2uL～4uL。

3.5 结果计算

按式(1)计算：

式中：X—10-羟基-a-癸烯酸含量，％；

F—校正因子；

A_s—试样中内标峰面积；

A_i—试样中被测组分峰面积；

m_s—内标质量，g；

m_i—试样质量，g。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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