1．检测原理

食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。最小检出量：新红5ng、柠檬黄4ng、觅菜红6ng、胭脂红8ng、日落黄7ng、赤鲜红18ng、亮蓝26ng，当进样量相当0.025g时，检出浓度分别为0.2mg/kg；0.16mg/kg；0.24mg/kg；0.32mg/kg；0.28mg/kg；0.72mg/kg；1.04mg/kg。

2．试剂与材料

(1)正己烷、盐酸、乙酸、饱和硫酸钠溶液、硫酸钠溶液(2g/L)、甲醇(经滤膜0.5um过滤)、聚酰胺粉(尼龙6，过200目筛)

(2)乙酸铵溶液(0.02mol/L)：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0.45um)过滤。

(3)氨水：量取氨水2mL，加水至100mL,混匀。

(4)氨水-乙酸铵溶液(0.02mol/L)：量取氨水0.5 mL，加乙酸铵溶液(0.02mol/L)至1000mL，混匀。

(5)甲醇-甲酸(6+4)溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL,混匀。

(6)柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸(C₆H₈O₇·H₂O)，加水至100mL，溶解混匀。

(7)无水乙醇-氨水-水(7+2+1)溶液：量取无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL，混匀。

(8)三正辛胺正丁醇溶液(5％)：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL,混匀。

(9)pH6的水：水加柠檬酸溶液调pH到6。

(10)合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为100％质量的柠檬黄、日落黄、觉菜红、胭脂红、新红、赤鲜红、亮蓝、靛蓝各0.100g，置100mL容量瓶中，加pH6水到刻度，配成水溶液(1.00mg/mL)。

(11)合成着色剂标准使用液：临用时上述溶液(或将10)加水稀释20倍，经滤膜(0.45um)过滤。配成每毫升相当50.0ug的合成着色剂。

3．仪器

高效液相色谱仪，带紫外检测器，254nm波长。

4．检测步骤

1)试样处理

(1)橘子汁、果味水、果子露汽水等：称取20.0～40.0g，放入100mL烧杯中。含二氧化碳样品加热驱除二氧化碳。

(2)配制酒类：称取20.0～40.0g，放入100mL烧杯中，加小碎瓷片数片，加热驱除乙醇。

(3)硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等：称取5.00～10.00g粉碎样品，放入100mL小烧杯中，加水30mL，温热溶解，若样品溶液pH较高，用柠檬酸溶液调pH到6左右。

(4)巧克力豆及着色糖衣制品：称取5.00～10.00g，放入100mL小烧杯中，用水反复洗涤色素，到试样无色素为止，合并色素漂洗液为样品溶液。

2)色素提取

(1)聚酰胺吸附法。样品溶液加柠檬酸溶液调pH到6，加热至60℃，将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60℃pH4的水洗涤3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3～5次(含赤醉红的样品用液-液分配法处理)，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，每次5mL,收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经滤膜(0.45um)过滤，取10uL进高效液相色谱仪。

(2)液-液分配法(适用于含赤鲜红的样品)。将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加2mL盐酸、三正辛胺正丁醇溶液(5％)10～20mL，振摇提取，分取有机相，重复提取至有机相无色，合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗2次，每次10mL，分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热浓缩至10mL，转移至分液漏斗中，加60mL正己烷，混匀，加氨水提取2～3次，每次5mL，合并氨水溶液层(含水溶性酸性色素)，用正己烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至5mL。经滤膜(0.45um)过滤，取10uL进高效液相色谱仪。

3)高效液相色谱参考条件

(1)柱：YWGC8 10um不锈钢柱4.6mm (i.d.)×250mm。

(2)流动相：甲醇，乙酸铵溶液(pH 4,0.02mol/L)。

(3)梯度洗脱：甲醇：20％～35％, 3％/min; 35％～98％, 9％/min; 98％继续6min。

(4)流速：1mL/min。

(5)紫外检测器，254nm波长。

4)测定

取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

5．结果计算

试样中着色剂的含量按下式计算：

式中：X—试样中着色剂的含量，g/kg;

A—样液中着色剂的质量，ug;

V₂—进样体积，mL;

V₁—试样稀释总体积，mL;

m—试样质量，g。

计算结果保留两位有效数字。

6．精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。

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文章来源：《食品安全快速检测技术》

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