1．概述

玫瑰红B也称罗丹明B，俗称花粉红，是一种鲜桃红色、碱性的人工荧光燃料，主要用于造纸工业染蜡光纸、打字纸，也用于制造油漆、图画等颜料，也为蚕丝织物和皮革等染色。该物质可以透过皮肤，引起皮下组织生肉瘤，是致癌物质。高浓度时对人体有剧毒作用。该物质还具有脂溶性，常被不法商贩用来作为调味品(主要是辣椒油和辣椒粉)的染色剂，使用被添加过玫瑰红B的调味品制作食品会造成残留。

2．玫瑰红B的速测技术—试剂盒法

1)速测原理

样品中的玫瑰红经提取剂提取后，然后经净化剂净化，直接观察即可判断样品中是否含有玫瑰红B。检测速度快，测量一个样品需10min左右，操作简便。

2)速测范围

调味品(辣椒油和辣椒粉等)。检测下限：1mg/kg。

3)说明

在使用试剂时，必须注意安全，若不小心将试剂溅到皮肤上时，要立即用清水冲洗。样品原料中含有玫瑰花时不适用本法。本法适用于现场快速检测，具体结果以法定检测单位的检测结果为准。

3．玫瑰红B现场快速检测技术及实验室检测方法

1)速测原理

使用玫瑰红B对调味品染色时若含量较高，甚至直接掺入，可进行现场检测。食品中因其含量较低，需送实验室检测。现场检测中使用非极性有机溶剂(例正己烷、正己烷＋丙酮等)将其溶解并提取出，提取液流过中性氧化铝固相萃取小柱吸附玫瑰红B，用非极性有机溶剂(例正己烷)淋洗小柱，洗脱样品油脂和食品内源性干扰物，用肉眼可观测到在小柱上出现鲜亮的粉红色条带，判定为可疑样品，该样品需送实验室做进一步确证检验。实验室检测法仍然采用非极性有机溶剂将玫瑰红B从食品中溶解并提取出，提取液流过中性氧化铝固相萃取小柱吸附玫瑰红B，用非极性有机溶剂洗脱样品油脂和食品内源性干扰物，再用极性有机溶剂(例甲醇)将玫瑰红B从小柱上洗脱并收集，用反相高效液相色谱仪-紫外/可见光检测器进行定性定量检测。

2)试剂和材料

(1)层析用中性氧化铝(100目)，使用前于105℃烘2h，取下置干燥器中冷至室温，装入玻璃瓶中密闭放置。

(2)正己烷(分析纯)。

(3)丙酮(分析纯)。

(4)甲醇(色谱纯)。

(5)20％丙酮的正己烷液：取100mL丙酮加400mL正己烷混合，作为玫瑰红B的提取液和净化液。

(6)氧化铝固相萃取小柱：取5 mL塑料注射器管，下端口塞入小块脱脂棉，装入处理好的氧化铝约3cm高，放置备用。

(7)玫瑰红B标准溶液：称取玫瑰红B(分析纯试剂)5.0mg，用20％丙酮的正己烷液溶解并定容至50mL，配成含量为10ug/mL的标准储备液。取此液0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mL，用20％丙酮的正己烷液稀释并定容至50mL，配成浓度为0.0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0ug/mL标准系列溶液。

3)现场快速检测方法(源自大连市产品质量监督检验所)

(1)辣椒粉。取辣椒粉一小勺(约5g)放入小烧杯中，加入约40mL含20％丙酮的正己烷，摇动或搅拌2 min，静置。取5 mL塑料注射器套管，下端口塞入小块脱脂棉，将事先处理好的氧化铝倒入注射器管中约3cm高，做成氧化铝固相萃取小柱，待样品杯上方澄清后，慢慢倒入小柱中，下端接一废液杯，视颜色深浅倒入2～5mL，注意不要倒入太多，保证小柱的中下部仍为白色，此时，含玫瑰红B的样品在柱上部会出现鲜亮的粉红色荧光条带，条带边缘清晰，粉红色随含量的增加而加深和加宽；不含玫瑰红B的样品提取液不会出现粉红色条带，只会出现黄红色的界面不清晰的宽带。然后用含20％丙酮的正己烷20mL慢慢倒入小柱，粉红色的条带不下移，但更清晰，其余的黄红色带下移，可大部分被洗脱出，即可判断为含玫瑰红B的可疑样品。

(2)辣椒油。取辣椒油一小勺(约2g)放入小烧杯中，加入约10mL正己烷，混匀。按上述“(1)辣椒粉”项中“取5 mL塑料注射器套管……即可判断为含玫瑰红B的可疑样品。”操作。

(3)判定。初步判断为含玫瑰红B的可疑样品需送实验室中进行液相色谱确证检验。

4)实验室检测方法(源自大连市产品质量监督检验所)

(1)仪器。

高效液相色谱仪(双泵、紫外/可见光检测器)；

色谱柱C18 4.6mm×15cm (5um)。

(2)提取和纯化。

①辣椒粉。取辣椒粉1g，加入20mL含20％丙酮的正己烷，振摇10min，静置或过滤分离出上层清液，残渣加入10mL含20％丙酮的正己烷重复提取一次，合并2次提取液，混匀。用滴管将上清液加入氧化铝小柱中(小柱预先用5mL提取液润湿)，视颜色深浅决定上柱量，保证上完样的小柱中下部仍为白色，含玫瑰红B的样品提取液在柱上部会出现鲜亮的粉红色荧光条带，且粉红条带随含量的增加而加深和加宽，不含玫瑰红B的样品提取液不会出现粉红色条带，只会出现黄红色的不清晰的宽带，用含20％丙酮的正己烷洗小柱，粉红色的条带不下移，但更清晰，其余的黄红色带下移可大部分被洗脱出，可判断为含玫瑰红B的可疑样品，待洗柱的流出液无色时，滴入5～10mL甲醇，将玫瑰红B色带洗下并收集，用甲醇定容后，注入高效液相色谱仪进行确认。

②辣椒油。称取辣椒油1g，加入10mL含20％丙酮的正己烷，混合均匀后滴入氧化铝小柱中，按照上述“①辣椒粉”项中“用滴管将上清液加入氧化铝小柱……注入高效液相色谱仪进行确认”进行操作。

③其他食品。对于使用了红辣椒油(粉)调味的食品(如红油豆制品、红油鱼干等)称取10～20g，用20％丙酮的正己烷洗下红油(粉)，或将样品与洗脱液搅成匀浆将玫瑰红B溶解提取出，将样品液静置或离心，分出有机相，根据水分的多少加入适量无水硫酸钠脱水，按照上述“①辣椒粉”项中“用滴管将上清液加入氧化铝小柱注入高效液相色谱仪进行确认”进行操作。含量少的样品因粉红色条带太窄和颜色较淡肉眼看不清楚，仍可采用上述办法，进一步用20％丙酮的正己烷洗涤小柱至流出液无色时，滴入5～10mL甲醇，将玫瑰红B色带洗下并收集，经浓缩后，注入高效液相色谱仪进行确证检验。

(3)液相色谱条件。

①色谱柱：C18 4.6mm×15cm(5um)进样5 mL。

②流动相：75％甲醇水溶液1 mL/min。

③检测器：紫外／可见光(UV/VIS)检测器，波长：550nm。

④定性定量：玫瑰红B标准溶液保留时间定性，外标法定量。

(4)结果计算。

Y＝c·V/m

式中：Y—样品中玫瑰红B的含量， mg/kg;

c—从标准曲线上查得的玫瑰红B的浓度，ug/mL;

V—测试样品总定容体积，mL;

m—样品的称样量，g。

(5)说明。

①使用C18柱的性能有差异，流动相浓度应略做调整。

②在本法所给分离条件下，样品基质在玫瑰红B附近无干扰峰，其他许多红色偶氮染料均可在玫瑰红B之后出峰，注意调整这些干扰峰与玫瑰红B分离度，干扰的成分为：苏丹橙G、对位红、苏丹红7B、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ等。

文章来源：《食品安全快速检测技术》

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