5)速测步骤

(1)试样的制备。称取混合均匀的15g原料乳样品(准确至0.01g)，置于50mL具塞刻度试管中，加入30mL乙腈，剧烈振荡6 min，加水定容至满刻度，充分混匀后静置3 min，用一次性注射器吸取上清液用针式过滤器过滤后，作为高效液相色谱分析用试样。

(2)高效液相色谱测定。

①色谱条件。

色谱柱：强阳离子交换色谱柱，SCX, 250mm×4.6mm (i.d.), 5um，或性能相当者。

注：宜在色谱柱前加保护柱(或预柱)，以延长色谱柱使用寿命。

流动相：磷酸盐缓冲溶液-乙腈(70+30，体积比)，混匀。

流速：1.5mL/min。

柱温：室温。

检测波长；240nm。

进样量：20uL。

②液相色谱分析测定。

a. 仪器的准备。开机，用流动相平衡色谱柱，待基线稳定后开始进样。

b．定性分析。依据保留时间一致性进行定性识别的方法。根据三聚氰胺标准物质的保留时间，确定样品中三聚氰胺的色谱峰。必要时应采用其他方法进一步定性确证。

c．定量分析。校准方法为外标法。

d．校准曲线制作。根据检测需要，使用标准工作溶液分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制校准曲线。

e．试样测定。使用试样分别进样，获得目标峰面积。根据校准曲线计算被测试样中三聚氰胺的含量(mg/kg)。试样中待测三聚氰胺的响应值均应在方法线性范围内。

注：当试样中三聚氰胺的响应值均超出方法的线性范围的上限时，可减少称样量再进行提取与测定。

③结果计算。

a.计算公式为

式中：X—原料乳中三聚氰胺的含量，mg/kg;

c—从校准曲线得到的三聚氰胺溶液的浓度，mg/L;

V—试样定容体积，mL;

m—样品称量质量，g。

b．计算结果有效数字。通常情况下计算结果保留3位有效数字；结果在0.1～1.0mg/kg时，保留2位有效数字；结果＜0.1mg/kg时，保留1位有效数字。

3．三聚氰胺的速测技术—试剂盒法(目视比浊法和仪器比色法)

1)速测原理

显色剂与三聚氰胺反应，生成白色混浊物，通过目视比浊法或在410nm处测量浊度／吸光度，从而实现三聚氰胺含量的定性判断或定量检测。

2)试剂盒组成

1瓶显色剂A+1瓶显色剂B。配件：1支滤器+1盒0.45um滤膜。

本方法使用的试材由北京中卫食品科技公司、广州天河绿洲生化研究中心提供。

3)速测方法

(1)样品预处理方法。纯牛乳、酸乳等液体样品，直接称取混合均匀的样品2.0g；酸乳、果乳等较稠的样品，称取混合均匀的样品2.0g，加水5mL，颠倒混匀；乳粉等固体样品，称取充分混匀的样品2.0g，加水10mL，颠倒混匀。

向制备好的样品中加入15mL乙腈，以沉淀蛋白质，振荡提取5min，加蒸馏水至25mL, 4000r/min离心5min(或静置5min)，上清液过0.45um滤膜，作为提取液待用。

(2)目视比浊法(定性判断)。

样品测量：取一支10mL干净的透明玻璃管，加入显色剂A 1mL，显色剂B 2mL,最后加入3mL待测提取液，颠倒混匀3min后观察是否有明显白色浑浊物出现。如果有明显的白色浑浊物出现，说明待测液中的三聚氰胺的含量5mg/kg，沉淀量越多含量越高；如果没有明显的白色浑浊物出现，则说明待测样中的三聚氰胺的含量＜5mg/kg。

建议样品测定最好和空白进行比对，将有助于结果的判断。(空白比对：另取一支干净的10mL的透明玻璃管，加入显色剂A 1mL，显色剂B 2mL，最后加入3mL蒸馏水，颠倒混匀后作为空白比对样。)

(3)仪器比色法(定量检测)。

①打开仪器的电源开关。待自检完成后，选择测量波长至410nm，将蒸馏水加入到10mm比色皿中，进行校零。

②空白样的测量。取一支干净的10 mL透明玻璃管，加入显色剂A 1mL，再加入显色剂B 2mL，最后加入3mL蒸馏水，颠倒摇匀后，立即将溶液转入10mm比色皿中，于410nm处测定试剂空白的吸光度值。

③样品的测量。取一支干净的10 mL透明玻璃管，加入显色剂A 1mL，再加入显色剂B 2mL，最后加入3mL待测提取液，颠倒摇匀后，立即将溶液转入10mm比色皿中，于410nm处读取(在加入待测液后3min之内读取)样品吸光度值。将扣除试剂空白吸光度值后的差值代入标准曲线计算待测样品的浓度mg/kg (mg/L)。

4)标准曲线的绘制

用三聚氰胺标准品配制标准溶液，进行标准曲线的绘制。注意检测范围5.0～50.0mg/L。

5)说明

加入待测提取液后颠倒摇匀后请立即测量，混匀后3min之内测量结果有效。

必须对样品进行预处理，否则结果不可靠。

文章来源：《食品安全快速检测技术》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。